دنیای میکروب ها
سال:1394 | دوره:8 | شماره:3 (پیاپی 24) |تعداد مقالات:9

سابقه و هدف: ویروس لارینگو تراکئیت عفونی (ILTV)، از مهمترین عوامل بیماری زا از نظر اقتصادی در صنعت طیور است. ماکیان تنها مخزن اصلی این ویروس به شمار می آیند. در حال حاضر برای تشخیص این ویروس روش سریع، حساس و دقیقی وجود ندارد. این مطالعه با هدف ارزیابی و معرفی یک روش دقیق مولکولی با استفاده از تکنیک Real-time PCR و مبتنی بر ژن اختصاصی UL27 ویروس ILT، به منظور تشخیص سریع این ویروس انجام شد.مواد و روش ها: در این مطالعه تجربی، پس از تهیه نمونه ویروسی،DNA  مربوطه با استفاده از کیت استخراج اسیدهای نوکلئیک از ویروس استخراج گردید. سپس حضور ژن اختصاصی UL27 ویروس، ابتدا با روش PCR با استفاده از پرایمرهای اختصاصی و در نهایت با تکنیک Real-time PCR با استفاده از پرایمرها و پروب اختصاصی مورد ارزیابی قرار گرفت.یافته ها: مشاهده قطعه مورد انتظار 96 جفت بازی در آنالیز ژل الکتروفورز، حضور ژن اختصاصی UL27 را در نمونه های ویروسی تایید نمود. همچنین نتایج ارزیابی سنجش Real-time PCR نیز بر روی نمونه های یاد شده مثبت بود. نتیجه گیری: این مطالعه نشان داد که روش مولکولی Real-time PCR روش مناسبی برای تشخیص سریع و دقیق ویروس لارینگو تراکئیت عفونی، به واسطه ردیابی ژن اختصاصی UL27 می باشد.

سابقه و هدف: بورخولدریا مالئی عامل مشمشه و یکی از قدیمی ترین بیماری های عفونی واگیردار و مشترک بین انسان و حیوان است که اغلب تک سمی ها (اسب، الاغ، قاطر و گورخر) را مبتلا می نماید. همگام با پیشرفت در مطالعه ژنوم باکتری های بیماری زا در سال های اخیر، روش های مولکولی به منظور مطالعه مقایسه ای و اپیدمیولوژی بورخولدریا مالئی توسعه یافته اند. این مطالعه برای اولین بار با هدف بهینه سازی روش آنالیز متکی بر واحدهای پشت سر هم تکرار شونده (VNTR) بر پایه چهار لوکوس BM140، BM1367،BM2065  وBM2971  به منظور تایپینگ مولکولی بورخولدریا مالئی انجام شد.مواد و روش ها: در این مطالعه، سویه بورخولدریا مالئی Razi 325 به عنوان سویه استاندارد از آرشیو میکروارگانیسم های موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی تهیه شد. پس از استخراج ژنوم و انجام PCR برای هر 4 لوکوس، نتایج مربوطه برای هر لوکوس به صورت مستقل و تجمیعی مورد بازبینی قرار گرفت. یک دستورالعمل واحد قابل اجرا از نظر دما و غلظت اجزای مهم متغیر سازنده (کلرایدمنیزیم و پرایمرها) برای همه لوکوس ها تنظیم شد.یافته ها: مقایسه توالی جدایه با سویه های مرجع، پلی مورفیسم را در هر 4 لوکوس مورد مطالعه نشان داد.نتیجه گیری: شاخص ترین یافته کاربردی این تحقیق، توسعه یک دستورالعمل واحد PCR بود که هم از نظر اجزا و هم از نظر دما امکان اجرای چهار واکنش متفاوت را به صورت هم زمان در یک دور فعالیت ماشین PCR فراهم نمود.

سابقه و هدف: اشریشیا کلی مهمترین عامل ایجاد اسهال گوساله ها در روزهای اول زندگی می باشد. از مهمترین راهبردهای کنترل و پیشگیری از این بیماری واکسیناسیون مادران بارداراست که به واسطه خوراندن آغوز به نوزاد انجام می شود. این مطالعه با هدف شناسایی مولکولی باکتری اشریشیا کلی K99 و ارزیابی تیتر سرمی آن در حیوان آزمایشگاهی انجام شد.مواد و روش ها: این پژوهش به صورت تجربی بر روی حیوان آزمایشگاهی رت انجام گرفت. در ابتدا از روش Multiplex PCR برای شناسایی ژن های عوامل بیماریزایی K99،F41  و STa استفاده شد. پس از کشت باکتری در محیط کشت مینکای مایع، با افزودن فرمالین 0.4 درصد غیر فعال گردید. آنتی ژن حاصل پس از شستشو با PBS و سانتریفیوژ آماده سازی گردید. میزان تقریبی آنتی ژن برای تزریق به رت در 2 دوز107CUF/ml  و 109 تنظیم شد. گروه آزمون، آنتی ژن را در دو نوبت همراه با اجوانت آلوم به صورت زیر پوستی دریافت کردند. گروه کنترل نیز همه موارد به جز آنتی ژن را دریافت نمودند. خون گیری تا هشت هفته صورت گرفت و تیتر آنتی بادی در سرم ها تعیین شد.یافته ها: رت های ایمن شده افزایش تیتر از هفته چهارم تا انتهای هفته هفتم را نشان دادند. میانگین عیارآنتی بادی های سرمی رت های ایمن شده به طور معنی داری بیشتر از گروه شاهد بود. اما در گروهی که دوز بالاتری از آنتی ژن را دریافت کرده بودند، عیارآنتی بادی بیشتر از گروه دیگر بود. اما سرعت کاهش عیار آنتی بادی هر دو گروه هم زمان و در پایان هفته هفتم مشاهده گردید.نتیجه گیری: با توجه به نتایج به دست آمده استفاده از دوز بالاتر آنتی ژن تزریقی باعث افزایش میزان عیار آنتی بادی و ایمنی پایدارتر می شود. بنابراین برای القای پاسخ ایمنی در بدن حیوان کارآمدتر می باشد.

سابقه و هدف: شیر و فرآورده های آن در بعضی شرایط، موجب رشد عوامل بیماری زا از جمله اشریشیا کلی که مهمترین آلوده کننده مواد غذایی است می گردند. این مطالعه با هدف بهینه سازی روش شناسایی اشریشیا کلی در بستنی بر مبنی16S rDNA  انجام شد.مواد و روش ها: در این مطالعه مقطعی-توصیفی از 200 نمونه بستنی جمع آوری شده از مناطق محتلف اصفهان، تعداد 82 جدایه باکتریایی جداسازی گردید. از این تعداد 48 جدایه اندول مثبت بودند. جداسازی بر اساس استاندارد ملی ایران شماره 2946 و استفاده از محیط های کروموژنیک به صورت مقایسه ای انجام شد. پس از انجام آنالیز عددی و سایر آزمون ها، به کمک PCR قطعه 16S rDNA تکثیر و سپس توالی یابی گردید.یافته ها: با توجه به روش ارائه شده در استاندارد ملی روش یاد شده دارای 88 درصد صحت و 12 درصد خطا می باشد. در این بررسی جدایه های اندول مثبت مانند اشریشیا هرمانی، پروویدنشیا رتگری، کلبسیلا اکسی توکا و مورگانلا مورگانی توانستند در نتیجه نهایی ارائه شده در استاندارد ملی ایران خطا ایجاد نمایند.نتیجه گیری: آنالیزهای انجام شده با استفاده از محیط های کشت حاوی مواد کروموژنیک نشان داد که با صحت بالاتر، سرعت بیشتر و قیمت ارزان تر می توان اشریشیا کلی تیپیک را شناسایی نمود.

سابقه و هدف: افزایش بازده تولید محصول همراه کاهش هزینه های تمام شده، از جنبه های مهم تحقیقات زیست فناوری است. از آنجایی که آنتی بیوتیک ها از نظر مصرف سالیانه، مقام دوم را میان فرآورده های زیستی دارند، پژوهش های بسیاری به منظور افزایش تولید این فرآورده ها صورت گرفته است. این مطالعه با هدف بهینه سازی ترکیبات محیط کشت تخمیر از نظر منبع نیتروژنی، در تولید اریترومایسین انجام شد.مواد و روش ها: این مطالعه تحقیقی با نمونه گیری منظم از متابولیت های تولید شده توسط سویه ساکاروپلی اسپورا اریترا در تهران انجام گرفت. پس از گذراندن مراحل اسپورزایی، بذردهی و تخمیر، تاثیر غلظت های مختلف پودر آب پنیر بر روی شاخص های مختلف مانند pH، وزن تر زیست توده، تغییرات ریخت شناسی سویه ساکارو پلی اسپورا اریترا مورد بررسی قرار گرفت. همچنین غلظت اریترومایسین تولید شده با روش اسپکتروفتومتری اندازه گیری شد.یافته ها: نتایج به دست آمده بیانگر تاثیر غلظت های مختلف پودر آب پنیر بر روی شاخص های تخمیر بود. استفاده از ترکیب کنجاله سویا و پودر آب پنیر باعث افزایش میزان تولید اریترومایسین، کاهش زمان تخمیر و در نتیجه کاهش هزینه های تولید گردید. غلظت بهینه منبع نیتروژنی در فرآیند تخمیر میکروبی به منظور تولید اریترومایسن معادل 54g/l پودر آب پنیر به همراه12g/l  کنجاله سویا محاسبه شد.نتیجه گیری: پودر آب پنیر از جمله منابع ارزان قیمت نیتروژنی است و استفاده از آن می تواند ضمن کاهش هزینه ها، بازده تولید را افزایش داده و جایگزین مناسبی برای سایر منابع نیتروژنی در ابعاد صنعتی باشد.

سابقه و هدف: پساب برنج یکی از مهم ترین و فراوان ترین پساب های شهری است که روزانه به میزان فراوانی تولید می شود. و به دلیل بار بالای مواد آلی می تواند به عنوان گزینه مناسب در تولید اتانول(سوخت زیستی سازگار با محیط زیست) به کارگرفته شود. این مطالعه با هدف بررسی تولید اتانول از پساب برنج با استفاده از فرآیند هیدرولیز آنزیمی و تخمیر توسط قارج آسپرژیلوس نایجر و مخمر ساکارومایسس سرویزیه انجام شد.مواد و روش ها: برای بهینه سازی فرآیند هیدرولیز آنزیمی توسط قارچ آسپرژیلوس نایجر به منظور تولید گلوکز، تاثیر غلظت های مختلف پساب با میزان نشاسته اولیه (20، 40، 50، 60 و 80) گرم بر لیتر، و منبع نیتروژنی (NH4NO3، NH4SO4 و NH4CL) مورد بررسی قرار گرفتند. به منظور تعیین غلظت قند تولید شده از روش DNS استفاده شد. برای اندازه گیری غلظت اتانول تولیدی از دستگاه کروماتوگرافی گازی استفاده گردید.یافته ها: نتایج نشان داد که غلظت 60 گرم بر لیتر و منبع نیتروژنیNH4SO4  بیشترین تاثیر را بر روی گلوکز تولیدی به میزان 31.84 و 32.27 گرم بر لیتر دارا می باشد. نتایج بررسی تولید اتانول توسط مخمر ساکارومایسس سرویزیه از پساب هیدرولیز شده با غلظت گلوکز اولیه 32.4 گرم برلیتر نشان داد که بیشترین میزان اتانول تولیدی و بازده آن به ترتیب برابر با 11.51 گرم بر لیتر و 0.37 گرم اتانل در هر گرم از کل قند می باشد. همچنین بیشترین میزان وزن خشک سلولی و بازده آن به میزان 2.98 گرم توده زیستی و 0.14g CDW/g total sugar به دست آمد.نتیجه گیری: با توجه به فراوان بودن پساب برنج و همچنین میزان بازده اتانول تولیدی، پساب مورد نظر می تواند به عنوان یک سوبسترای مناسب در تولید اتانول به عنوان یک سوخت زیستی بکار گرفته شود.

سابقه و هدف: اسید سیتریک یکی از مهم ترین اسیدهای آلی می باشد که مصرف آن در جهان از اهمیت بالایی برخوردار بوده و سالیانه تقاضای آن رو به افزایش است. این مطالعه با هدف بهینه سازی تولید اسید سیتریک توسط قارچ آسپرژیلوس نایجر در حضور و عدم حضور ترکیب SR63 انجام شد.مواد و روش ها: در این مطالعه به منظور جداسازی آسپرژیلوس نایجر از نمونه های مختلف محیطی شامل هوا، سطح برگ گیاهان، آب و خاک استفاده گردید. جدایه های برتر از نظر تولید اسید سیتریک بر روی محیط اختصاصی چاپ کداکس آگار غربالگری شدند. به منظور افزایش بازده تولید، ترکیب SR63 به محیط کشت مایع تخمیری اضافه گردید. بهینه‏ سازی شرایط تخمیر، دمای محیط کشت و زمان تخمیر مورد بررسی قرار گرفت.یافته ها: در مجموع 10 جدایه از محیط های مختلف به دست آمد که تنها یکی از آنها از نظر تولید اسید سیتریک نسبت به بقیه عملکرد بهتری داشت. از نظر بهینه سازی بهترین نتیجه در دمای 30 درجه سلیسیوس، مدت زمان 6 روز و استفاده از رقت 0.0125 گرم بر لیتر از ترکیب SR63 در 5 pH به دست آمد.نتیجه گیری: با توجه به نتایج به دست آمده، ترکیب SR63 با جلوگیری از رشد بیشتر ریسه های قارچ آسپرژیلوس نایجر می تواند موجب افزایش در تولید اسید سیتریک گردد.

آفلاتوکسین M1 از متابولیت های آفلاتوکسین B1 است و در شیر حیواناتی که با غذای آلوده تغذیه شده باشند یافت می گردد. وجود آفلاتوکسین M1 در شیر باعث ایجاد مشکلاتی در انسان مانند سرکوب سیستم ایمنی، ایجاد جهش، ناقص الخلقه زایی و سرطان می شود. این مطالعه با هدف ارزیابی میزان افلاتوکسین M1 در نمونه های شیر کارخانه های لبنیاتی گیلان به روش الایزا انجام شد. در این مطالعه مقطعی، در مجموع 100 نمونه شیر به طور تصادفی در فصل های مختلف (هر فصل 5 نوبت) از 5 کارخانه شیر در استان گیلان در سال 1391 جمع آوری گردید. میزان غلظت آفلاتوکسین M1 در نمونه های مورد نظر با روش الایزا مورد بررسی قرار گرفت. از مجموع نمونه ها، 11 نمونه (11 درصد) دارای آلودگی کمتر از حدمجاز کدکس (50ng/l) بودند. نمونه های فصل تابستان با میانگین آلودگی 70.92 نانوگرم بر لیتر کمترین و فصل زمستان با میانگین آلودگی 137 نانوگرم بر لیتر بیشترین میزان آلودگی را داشتند. کارخانه (ب) با میانگین سالانه 135.15ng/l و کارخانه (د) با میانگین سالانه 60.90ng/l به ترتیب بیشترین و کمترین میزان آلودگی را دارا بودند. با توجه به اینکه 89 درصد نمونه های شیر آلودگی بیش از حد مجاز داشتند و آلودگی شیر می تواند مشکلات فراوانی برای سلامت جامعه ایجاد نماید، بنابراین لازم به نظر می رسد که شیر و فرآورده های آن به صورت دوره ای برای میزان آلودگی به آفلاتوکسین M1 تحت کنترل قرار گیرند. همچنین غذای دام ها باید به گونه ای نگهداری شود که به قارچ های مولد آفلاتوکسین آلوده نگردد.