دنیای میکروب ها
سال:1392 | دوره:6 | شماره:2 (پیاپی 15) |تعداد مقالات:9

سابقه و هدف: امروزه اسینتوباکتر بامانی به دلیل افزایش سریع مقاومت به طیف گسترده ای از آنتی بیوتیک ها و نیز ایجاد عفونت های مشهور بیمارستانی با میزان مرگ و میر بالا، مشکلات زیادی را در سیستم درمان ایجاد نموده است. هدف از این پژوهش، بررسی اپیدمیولوژیکی سویه های اسینتوباکتر بامانی جمع آوری شده از بیمارستان نمازی شیراز، به روش AFLP و تعیین سطح مقاومت آنتی بیوتیکی برای طراحی برنامه درمانی مناسب بود.مواد و روش ها: این پژوهش به صورت مقطعی-توصیفی بر روی سویه های اسینتوباکتر بامانی به دست آمده از 7 واحد مختلف مراقبت های ویژه در بیمارستان نمازی شیراز انجام شد. تمامی جدایه های احتمالی به وسیله کیت های NE20API شناسایی شدند. مقاومت دارویی سویه ها نسبت به 20 آنتی بیوتیک مختلف با روش میکروبراث دایلوشن بررسی گردید. به منظور طبقه بندی فنوتیپی سویه ها با استفاده از نتایج به دست آمده، آنتی بیودندروگرام توسط نرم افزار SPSS طراحی شد. سپس آنالیز AFLP با هضم DNA سویه ها به وسیله آنزیم های MboI وMseI ، اتصال آداپتورهای طراحی شده، تکثیر اولیه و تکثیر انتخابی توسط پرایمرهای اختصاصی انجام گردید.یافته ها: در این مطالعه 54% (46 مورد) از سویه های اسینتوباکتر بامانی از نوع MDR، %43 (36 مورد) از نوع XDR و 2% (2 مورد) از نوع PDR بودند. الگوی مقاومت آنتی بیوتیکی حضور برجسته سویه های مقاوم به ایمی پنم (51%) و مروپنم (76%) را نشان داد. هچنین نتایج AFLP نشان دهنده سه خوشه اصلی (1، 3 و 4) بود که با شیوع عفونت های مختلف بیمارستانی ارتباط داشت.نتیجه گیری: نتایج این پژوهش نشان داد که تکثیر بالای سویه های اسینتوباکتر بامانی و انتقال مقطعی سویه ها در بین بخش های مختلف بیمارستان نمازی شیراز، موجب افزایش مقاومت دارویی و بروز شیوع های گسترده در بیمارستان شده است. بنابراین توجه به برنامه های مراقبتی متناسب با داده های به دست آمده از تحقیق اخیر در کنترل عفونت و درمان ضروری می باشد.

سابقه و هدف: لیپید میکروبی از نظر نوع و ترکیب به روغن حاصل از گیاهان و حیوانات شباهت دارد. در ابتدا به منظور تولید بیودیزل از روغن های گیاهی استفاده می شد. اما به دلیل هزینه تولید بسیار بالا، امروزه دیدگاه جدیدی در مورد تولید بیودیزل از منابع میکروبی به وجود آمده است. این مطالعه با هدف جداسازی و شناسایی مخمر مولد چربی با پتانسیل بالای تولید لیپید، بهینه سازی و استخراج چربی تولید شده و آنالیز و تبدیل آن به بیودیزل انجام شده است.مواد و روش ها: در این پژوهش پس از جداسازی مخمر، تولید بالای لیپید میکروبی در محیط فقر ازت، پوشال گندم و برنج هیدرولیز شده برررسی شد. آنالیز روغن تولید شده با تکنیک کروماتوگرافی گازی - اسپکترومتری توده ای انجام گردید. همچنین بهینه سازی تولید لیپید، با دو روش تک عاملی و روش تاگوچی انجام و نتایج حاصل از آن ها مقایسه گردید. در نهایت سویه مخمر با استفاده از پرایمر های اختصاصی ITS شناسایی شد.یافته ها: سویه مخمری جداسازی شده در این مطالعه به عنوان ردوتورولا موسیلاژینوزا معرفی گردید. این سویه در شرایط بهینه به میزان بالای تولید معادل 10.97 g/1 لیپید و 18.84 g/1 توده زیستی خشک رسید. بیشترین اسیدهای چرب تولید شده نیز شامل پالمیتیک اسید (%18.51) و اولئیک اسید (67.29%) بود.نتیجه گیری: نتایج به دست آمده در این پژوهش نشان دهنده وجود سویه های بومی با ارزش در کشور است که می توان از آن ها در بخش های مختلف صنعتی به ویژه در تولید سوخت زیستی استفاده نمود.

سابقه و هدف: امروزه به منظور بررسی تفاوت های درون گونه ای و نژادی از روش RFLP ناحیه IGS استفاده می شود. این مطالعه با هدف شناسایی گونه های بیماری زای آلترناریا عامل تولید لکه برگی مرکبات با استفاده از روش های مورفولوژیک و توالی یابی ناحیه ITS1 در شهرستان ممسنی و نیز بررسی تفاوت های ژنتیکی جدایه های این قارچ بر اساس RFLP ناحیه IGS انجام گردید.مواد و روش ها: این پژوهش به صورت مقطعی- توصیفی بر روی 70 نمونه برگی گونه ها و ارقام مختلف مرکبات دارای علایم ظاهری مانند لکه قهوه ای و لکه برگی جمع آوری شده از باغات مرکبات شهرستان ممسنی در پاییز سال 1390 انجام شد. نمونه ها بر روی محیط سیب زمینی آگار کشت گردیدند. پس از خالص سازی قارچ به روش تک اسپور، شناسایی گونه ها با استفاده از بررسی خصوصیات مورفولوژیک انجام گرفت. اثبات بیماری زایی جدایه ها با استفاده از اصول کخ روی برگ ها صورت گرفت. تکثیر نواحیITS1  و IGS با استفاده از آغازگرهای اختصاصی انجام پذیرفت. ناحیه ITS1 جدایه ها توالی یابی شدند و ناحیه IGS پس از برش با استفاده از آنزیم های برش دهنده با روش RFLP ارزیابی شد.یافته ها: تمامی جدایه های مورد بررسی از لحاظ مورفولوژیک و توالی یابی ناحیه ITS1 به عنوان گونه آلترناریا آلترناتا شناسایی شدند. دندروگرام ترسیمی برای الگوهای برشی آنزیم های مورد استفاده، جدایه ها را در 3 گروه متمایز قرار داد. جدایه هایی که از ارقام پرتقال جمع آوری شده بودند همگی در یک گروه و جدایه های لیمو در یک گروه متمایز دیگر قرار گرفتند. همچنین جدایه لیموشیرین ویکوا در یک گروه کاملا مجزا از سایر جدایه ها قرار گرفت.نتیجه گیری: نتایج نشان داد که به کارگیری الگوهای برش آنزیمی ناحیه IGS می تواند مشکل مربوط به طبقه بندی جدایه های آلترناریا آلترناتا مرکبات بر حسب نوع میزبان را که در حال حاضر مورد بحث بسیار زیادی می باشد تاحدودی حل نماید.

سابقه و هدف: نئوسپورا کنینوم یکی از مهم ترین عوامل ایجاد کننده سقط جنین گاو در جهان به شمار می رود. تولید انبوه این تک یاخته در شرایط آزمایشگاهی با استفاده از کشت سلولی و رده های سلولی مختلف انجام می گردد. از طرفی استفاده از رده های سلولی معلق در تولید انبوه فرآورده های بیولوژیک بسیار مقرون به صرفه است. هدف از این مطالعه بررسی امکان کشت تک یاخته نئوسپورا کنینوم با استفاده از رده سلولی معلق Ka6 می باشد.مواد و روش ها: این پژوهش به صورت تجربی پس از کشت تاکی زوئیت نئوسپورا کنینوم بر روی رده سلولی Ka6 انجام شد. سپس توانایی این رده سلولی با رده سلولی Vero که در حال حاضر بهترین رده سلولی برای کشت نئوسپورا است با روش رنگ سنجی MTT مورد بررسی قرار گرفت.یافته ها: نتایج این پژوهش نشان داد که تاکی زوئیت های نئوسپورا کانینوم به خوبی درون سلول های Ka6 وارد، تکثیر و از این سلول ها خارج شده اند. همچنین تکثیر تاکی زوئیت های این تک یاخته در هر دو رده سلولی Ka6 و Vero نسبت به گروه کنترل معنی دار بود. اما میزان تکثیر نئوسپورا بر روی رده سلولی Ka6 تفاوت معنی داری نسبت به رده سلولی Vero نداشت.نتیجه گیری: این مطالعه اولین گزارش موفق آمیز کشت تک یاخته نئوسپورا کنینوم با استفاده از رده سلولی معلق می باشد. از آن جایی که رده سلولی Ka6 یک لنفوسیت ترانسفورم شده است و به دلیل امکان کشت آن به صورت معلق در سطح انبوه در بیوراکتور، استفاده از آن نسبت به رده سلولی Vero ارجحیت دارد.

سابقه و هدف: سودوموناس آئروژینوزا از مهم ترین پاتوژن های عفونی در پزشکی به شمار می آید. این باکتری عفونت های مختلفی به ویژه در بیماران دچار سوختگی های شدید و افراد دارای نقص سیستم ایمنی ایجاد می نماید. این پژوهش با هدف تهیه ترکیب آنتی ژنی کونژوگه با قابلیت القای تولید آنتی بادی و ایمنی خاطره ای علیه سودوموناس آئروژینوزا در مدل موش انجام شد.مواد و روش ها: این پژوهش به صورت تجربی بر روی سویه PAO1 باکتری سودوموناس آئروژینوزا انجام شد. در ابتدا باکتری در محیط اختصاصی کشت و آلژینات آن استخراج و تغلیظ گردید. سپس توکسوئید دیفتری، ADH و EDAC به عنوان مولکول فاصله گذار و مولکول اتصال دهنده اضافه شدند. محلول کونژوگه آلژینات و توکسوئید دیفتری از ستون کروماتوگرافی (CL-2B) عبور و آزمون های کنترل کیفی بر روی آن انجام شد. آنتی ژن تهیه شده به موش های نژاد BALB/c  با میزان 10 میکروگرم تزریق گردید. واکسیناسیون در سه دوز به صورت داخل صفاقی با فواصل دو هفته ای انجام و خون گیری دو هفته پس از هر تزریق صورت گرفت. سپس میزان آنتی بادی های سرمی برای IgA ,igG و IgM با روش الایزا اندازه گیری شد.یافته ها: آنتی بادی های سرمی گروه واکسینه شده با ALG-DT پس از هر تزریق افزایش معنی داری از لحاظ آماری داشتند. به طوری که میزان تیتر IgG تام،IgM و IgA  تولید شده علیه آلژینات در گروه های واکسینه با کونژوگه نسبت به آلژینات خالص در سه تزریق به ترتیب به طور متوسط 3.5، 1.7 و 1.2 برابر افزایش نشان داد.نتیجه گیری: افزایش تیتر آنتی بادی در گروه های واکسینه با کونژوگه آلژینات نشان دهنده فعال شدن سلول های T و ایجاد خاطره ایمنی می باشد. بنابراین کونژوگه آلژینات و توکسوئید دیفتری می تواند کاندید مناسبی به منظور تهیه واکسن باشد.

سابقه و هدف: پروتئازها یکی از مهم ترین آنزیم های کاربردی در بیوتکنولوژی و صنایع مختلف مانند صنایع چرم، صنایع غذایی، داروسازی، شوینده ها و غیره می باشند. میکروب ها به دلیل رشد سریع، سهولت کشت، دستکاری ژنتیکی در جهت تولید بهینه آنزیم، از منابع عمده تولید پروتئازها به شمار می روند. این مطالعه با هدف جداسازی سویه های سراشیا مارسیسنس از منابع طبیعی غرب مازندران و ارزیابی قابلیت تولید آنزیم پروتئاز انجام شده است.مواد و روش ها: این پژوهش به صورت مقطعی بر روی 150 نمونه جمع آوری شده از عمق 0 تا 10 سانتی متری خاک ها و آب های مناطق غرب مازندران انجام شد. به منظور جداسازی و شناسایی اولیه میکروارگانیسم های دارای فعالیت پروتئولیتیک از محیط کشت Skim milk agar و آزمون های یوشیمیایی استفاده شد. پس از استخراج DNA  و با استفاده از پرایمر اختصاصی ژن 16S rDNA گونه سراشیا مارسیسنس شناسایی گردید. سپس بهینه سازی دمایی و زمانی بر روی سویه های برتر مولد آنزیم انجام شد. همچنین وزن مولکولی تقریبی آنزیم به وسیله رسوب دهی پروتئین و روش SDS-PAGE تعیین گردید.یافته ها: در مجموع از 2 سویه سراشیا مارسیسنس جداسازی شده در این مطالعه، نمونهN به عنوان سویه جدید با نام سراشیا مارسیسنس سویه 424 در بانک جهانی ژن با شماره KC790390 به ثبت رسید. این دو سویه بیشترین مقدار تولید آنزیم را در دمای 37 درجه سانتی گراد و در مدت 24 ساعت نشان دادند. بیشترین تولید آنزیم مربوط به سراشیا مارسیسنس سویه 424 با فعالیت معادل 199.80 U/m1 و وزن مولکولی 52 کیلو دالتون بود.نتیجه گیری: نتایج به دست آمده در این مطالعه نشان دهنده پتانسیل بالای سراشیا مارسیسنس سویه 424 در تولید پروتئاز و سراشیوپپتیداز می باشد. بنابراین ارزیابی پتانسیل کاربردی این آنزیم ها در صنایع مختلف پیشنهاد می شود

سابقه و هدف: هیدروکربن های آروماتیک چند حلقه ای گروهی از ترکیبات آلی هستند که دارای دو یا چند حلقه آروماتیک می باشند. تقریبا 90% از این ترکیبات سرطان زا هستند. برای حذف این آلودگی ها از محیط زیست روش های مختلفی استفاده می شود اما استفاده از میکروارگانیسم ها برای پاکسازی این آلودگی ها موثرتر و ارزان تر می باشد. این پژوهش با هدف جداسازی باکتری های بومی تجزیه کننده فلورانتن از رسوبات جنگل های حرای خلیج فارس انجام شد.مواد و روش ها: این پژوهش به صورت مقطعی بر روی رسوبات جنگل های حرا خلیج فارس انجام شد. تعداد باکتری ها در محیط کشت حاوی فلورانتن و محیط کشت فاقد فلورانتن شمارش گردید. جداسازی باکتری های تجزیه کننده فلورانتن با کشت نمونه ها بر روی محیط پایه معدنی MSM و MSM آگار صورت گرفت. ارزیابی قدرت تجزیه کنندگی باکتری ها با استفاده از روش کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) انجام شد. در نهایت شناسایی مولکولی سویه های برتر با استفاده از روش16S rRNA انجام گرفت.یافته ها: تعداد باکتری های در محیط بدون فلورانتن بالاتر از محیط حاوی فلورانتن گزارش شد. از بین باکتری های جدا شده باسیلوس سیرکولانس، آلکالیژنز فکالیس، انتروباکتر، لیستریا و استافیلوکوکوس بیشترین توانایی را تجزیه فلورانتن داشتند. اما باکتری باسیلوس سیرکولانس و آلکالیژنز فکالیس با توانایی تجزیه کنندگی 73.4% و 71% بیشترین تجزیه و رشد را در حضور فلورانتن از خود نشان دادند.نتیجه گیری: یافته های این پژوهش نشان داد که رسوبات جنگل های حرای خلیج فارس دارای تعداد زیادی از باکتری های تجزیه کننده فلورانتن می باشند. این مساله ضرورت توجه به باکتری های بومی به منظور زیست پالایی آلاینده ای نفتی را نشان می دهد.

سابقه و هدف: باکتری های موجود در ناحیه ریزوسفر با محلول نمودن فسفات و تولید ترکیباتی از قبیل فیتوهورمون ها و ترشح آنزیم هایی مانند a- آمیلاز و کیتیناز به رشد گیاهان کمک می نمایند. این مطالعه با هدف جداسازی و شناسایی باسیلوس های تولید کننده -aآمیلاز از ریزوسفر درختان پرتقال و نیز ارزیابی تولید و فعالیت-a آمیلاز در حضور منابع مختلف کربن و دامنه های مختلف pH انجام شد.مواد و روش ها: این پژوهش به صورت مقطعی به منظور جداسازی باسیلوس های تولید کننده -a آمیلاز از ریزوسفر باغات پرتقال دلفارد در استان کرمان انجام شد. پس از جمع آوری نمونه، به منظور جداسازی باکتری از محیط آگار حاوی نشاسته استفاده گردید. از آزمون های بیوشیمیایی و مولکولی تعیین توالی ناحیه 16S rRNA برای شناسایی دقیق سویه مورد نظر استفاده شد. به منظور بررسی فعالیت آمیلازی از تست سریع هیدرولیز نشاسته استفاده گردید. همچنین تولید آنزیم در حضور منابع مختلف کربن شامل گلوکز، فروکتوز و نشاسته مورد بررسی قرار گرفت.یافته ها: پس از شناسایی بیوشیمیایی و تعیین توالی سویه برتر تولید کننده آنزیم با عنوان باسیلوس سرئوس سویه MR-R3 با شماره دستیابی KC306945.1 در بانک جهانی ژن ثبت گردید. همچنین نتایج نشان داد که نشاسته و گلوکز بیشترین اثر مثبت بر تولید آنزیم a- آمیلاز را در غلظت 0.5 گرم بر لیتر و فروکتوز بیشترین اثر را در غلظت 0.25 گرم بر لیتر دارا می باشند.نتیجه گیری: با توجه به کفایت مناسب تولید a- آمیلاز سویه جداشده در شرایط آزمایشگاهی، انجام مطالعات های گسترده تر در حد بالاتر به منظور شناسایی دقیق تر ویژگی های آنزیمی آن پیشنهاد می گردد.