دنیای میکروب ها
سال:1394 | دوره:8 | شماره:4 (پیاپی 25) |تعداد مقالات:11

سابقه و هدف: غلات به عنوان تغذیه اصلی طیور مطرح می باشد. غلات دارای میزان قابل توجهی پلی ساکارید غیرنشاسته ای (NSP) محلول می باشند. NSP منجر به افزایش اثرات منفی و ناسازگاری در طیور می شوند. مکمل آنزیمی بتاگلوکاناز با تجزیه پلی ساکاریدهای غیرنشاسته ای ویسکوزیته محتویات هضمی دستگاه گوارش را کاهش می دهد و جذب روده ای را بالا می برد. این مطالعه با هدف ایجاد سازواره ژنی گلوکاناز باکتری باسیلوس سوبتیلیس در باکتری اشریشیا کلی انجام شد. مواد و روش ها: در این مطالعه تجربی، با استفاده از پرایمرهای اختصاصی و روش واکنش زنجیره ای پلی مراز توالی کامل ژن گلوکاناز از باکتری باسیلوس سوبتیلیس تکثیر شد. پس از خالص سازی، ژن bgl با استفاده از روش T/A Cloning در وکتور pGEM کلون گردید. سپس ساختار پلاسمیدی pGEM-bgls در باکتری اشریشیا کلی سویه Top-10 ترانسفورم شد. باکتری ترانسفورم شده به محیط جامد LB محتوی آمپی سیلین (100 میکروگرم در هر میلی لیتر) منتقل شد. پلاسمید نوترکیب ترانسفورم شده در اشریشیا کلی سویه Top-10 و کلنی های حاوی پلاسمید به روش PCR انتخاب شد. تایید نهایی سازواره حاصل به روش هضم آنزیمی صورت گرفت.یافته ها: نتایج نشان داد که همسانه سازی ژن گلوکاناز در باکتری اشریشیا کلی به درستی صورت گرفته است. واکنش زنجیره ای پلی مراز همسانه سازی ژن 767 جفت بازی گلوکاناز را تایید نمود.نتیجه گیری: این پژوهش با ساخت سازواره ژنی گلوکاناز از باکتری باسیلوس سوبتیلیس و کلون کردن آن در باکتری اشریشیا کلی می تواند کاندیدای جدیدی در تولید پروبیوتیک برای دام و طیور معرفی نماید.

سابقه و هدف: عفونت ویروس هپاتیت C با اتصال پروتئین E2 ویروس به گیرنده سطح سلول کبد انسان آغاز می شود. بنابراین به عنوان یکی از اهداف تحقیقات دارو و واکسن بر علیه این عفونت مطرح می باشد. این مطالعه برای اولین بار در ایران با هدف انتقال تمام طول ژن HCV-2a (JFH1) E2 توسط وکتور نوترکیب pPICZAa-E2 به مخمر پیکیاپاستوریس سویه KM71H و بیان ژن یاد شده در این سیستم بیانی انجام شد.مواد و روش ها: ژن E2 با پرایمرهای واجد جایگاه آنزیم های برش دهنده EcoRI و XbaI به طور تمام طول تکثیر شد. این ژن به وکتورهای T-PTG19 و pPICZAa وارد و سپس به باکتری اشریشیا کلی منتقل گردید. وکتور نوترکیب pPICZAa-E2 با روش الکتروپوریشن به مخمر منتقل شد. انتقال توسط هضم آنزیمی و تعیین توالی بررسی گردید. مخمر به مدت 5 شبانه روز در محیط کشت بیانی YNB متانول دار رشد کرد و بیان ژن مورد نظر با روش وسترن بلات بررسی شد.یافته ها: ساخت وکتور نوترکیب واجد ژن تمام طول pPICZAa-(JFH1) E2، انتقال به میزبان های باکتریایی و مخمری و نیز بیان ژن در سیستم مخمری KM71H با موفقیت انجام شد.نتیجه گیری: در این پژوهش امکان بیان ژن تمام طول E2 ویروس هپاتیت C سویه JFH1 (به عنوان سویه مدل در تحقیقات بر روی این ویروس) با موفقیت انجام گرفت. نتایج این مطالعه می تواند راه گشای پژوهش های آینده جهت بررسی ساختار و عملکرد این پروتئین باشد.

سابقه و هدف: انواع مختلفی از تایپ های ویروس پاپیلومای انسانی با ضایعات ناحیه ژنیتال در ارتباط است. تایپ های 16 و 18 از مهم ترین عوامل اتیولوژیک مرتبط با دیسپلازی و کارسینومای سرویکس می باشند. این مطالعه با هدف شناسایی و اپیدمیولوژی ویروس پاپیلومای انسانی تایپ های 16 و 18 جدا شده از بیماران مبتلا به سرطان دهانه رحم مراجعه کننده به بیمارستان امام خمینی تهران انجام شد.مواد و روش ها: این مطالعه مورد- شاهدی بر روی 100 بیمار مبتلا به سرطان دهانه رحم و 48 فرد سالم به عنوان کنترل انجام گرفت. در ابتدا استخراج DNA به روش فنل-کلروفرم صورت گرفت. سپس ژن مربوطه با روش واکنش زنجیره ای پلی مراز تکثیر یافت. یافته ها: از مجموع 100 نمونه مورد بررسی، 79 درصد از نظر ابتلا به HPV مثبت بودند. با بررسی ژنوتایپ نمونه های مثبت مشخص گردید که 53 درصد از نمونه ها آلوده به تایپ 16 و 14 درصد آلوده به تایپ HPV18 بودند.نتیجه گیری: از آنجایی که ویروس HPV علامت و نشانه ای ندارد و با توجه به شیوع بالای آن در ایران، تشخیص به موقع و درمان سریع آن می تواند از تبدیل زخم های پیش سرطانی به سرطان پیشرفته جلوگیری نماید. روش های مولکولی مانند PCR می تواند به عنوان روشی سریع و مطمئن در تشخیص بیماری در مراحل اولیه مطرح باشد.

سابقه و هدف: باکتری لیزنی باسیلوس باکتری اندوفتیک است که از گیاه در برابر شرایط فیزیولوژیکی و زیست محیطی حفاظت می نماید. این مطالعه با هدف جداسازی و شناسایی مولکولی باکتری اندوفیت لیزنی باسیلوس ماکروئیدس از ریشه گندم و بررسی فعالیت ضد قارچی آن علیه گونه های تریکودرمایی انجام شد.مواد و روش ها: به منظور جداسازی باکتری های اندوفتیک از عصاره ریشه و ساقه گندم های کشت شده در مناطق مختلف استان مازندران و گلستان استفاده گردید. فعالیت ضد قارچی آن ها با روش کشت متقابل بر روی محیط سیب زمینی دکستروز آگار(PDA)  مورد ارزیابی قرار گرفت. پس از استخراج DNA ژنومی، از روش PCR به منظور تکثیر ژن 16S rRNA استفاده گردید. به منظور شناسایی دقیق باکتری جداسازی شده، محصول PCR تعیین توالی و ترادف بازی آن BLAST گردید.یافته ها: باکتری جداسازی شده قادر به مهار رشد قارچ های بیوکنترلی بود. نتایج تعیین توالی نشان داد که باکتری جداسازی شده متعلق به جنس لیزنی باسیلوس است و شباهت 99 درصدی به گونه لیزنی باسیلوس ماکروئیدس W1 دارد.نتیجه گیری: این مطالعه اولین گزارش جداسازی لیزنی باسیلوس از گیاه تحت عنوان اندوفتیک است. باکتری اندوفیت جداسازی شده در این بررسی می تواند به منظور استخراج، شناسایی و به کارگیری متابولیت های مهاری آن در طراحی و تولید داروهای ضد قارچی مورد استفاده قرار گیرد.

سابقه و هدف: باسیلوس سوبتیلیس با توانایی تولید طیف وسیعی از ترکیبات ضد میکروبی مانند لیپوپپتیدهای خانواده ایتورین در کنترل بیولوژیک تعداد زیادی از قارچ های بیماریزای گیاهی موثر می باشد. این مطالعه با هدف بررسی فعالیت ضد قارچی جدایه های بومی باسیلوس سوبتیلیس علیه فوزاریوم مونیلیفورم و ورتیسیلیوم داهلیا انجام شد.مواد و روش ها: به منظور جداسازی باسیلوس سوبتیلیس از خاک پارک های جنگلی هفت منطقه از تهران نمونه برداری به عمل آمد. فعالیت ضد قارچی جدایه های باسیلوس سوبتیلیس به کمک روش چاهک گذاری بررسی شد. دو جدایه با بیشترین قطر هاله عدم رشد انتخاب و با روش PCR شناسایی شدند. محیط آگار مغذی مایع به منظور تولید بیشترین متابولیت ضدقارچی توسط جدایه های یاد شده بهینه سازی شد. سپس متابولیت های حاصل از کشت چهار روزه تخلیص و وجود ایتورین A با روش کروماتوگرافی تایید گردید.یافته ها: از 91 سویه جداسازی شده از خاک، 23 سویه به عنوان باسیلوس سوبتیلیس شناسایی شدند. جدایه های شماره 36 و 78 به ترتیب علیه فوزاریوم مونیلیفورم و ورتیسیلیوم داهلیا بیشترین قدرت مهارکنندگی را نشان دادند. نتایج تطبیق توالی شباهت 100 درصدی این دو جدایه را به باسیلوس سوبتیلیس تایید نمود. جدایه ها بیشترین فعالیت ضد قارچی را در محیط آگار مغذی مایع با منبع کربن گلوکز، منبع نیتروژن عصاره مخمر،pH  خنثی و دمای 30 درجه سلیسیوس نشان دادند. بر اساس نتایج HPLC هر دو جدایه توانستند ایتورین A را در بازه زمانی مشابه با ایتورین استاندارد تولید کنند.نتیجه گیری: جدایه های بومی به خوبی می توانند متابولیت های ضدقارچی تولید نمایند. بنابراین می توانند کاندیدای مناسبی برای کنترل زیستی قارچ های بیماریزای گیاهی و جایگزینی برای قارچ کش های شیمیایی باشند.

سابقه و هدف: طراحی فرآیندهای تولید پروتئین های تک یاخته مستلزم تعیین الگوهای رشد میکروارگانیسم های تولید کننده می باشد. این مطالعه با هدف ارزیابی تولید پروتئین های تک یاخته قارچ آسپرژیلوس نایجر و شبیه سازی تولید توده سلولی بر اساس چند مدل غیر ساختاری انجام شد.مواد و روش ها: در این مطالعه آزمایشی تولید پروتئین های تک یاخته در کشت غوطه ور ناپیوسته با فرمولاسیون بهینه محیط کشت در دمای 25 درجه سلیسیوس، 6 pH و سرعت همزدن 300 دور در دقیقه به مدت 200 ساعت در انکوباتور شیکردار انجام شد. در پایان فرآیند، محتویات فلاسک ها به عنوان نمونه برای اندازه گیری غلظت گلوکز، وزن خشک توده سلولی و درصد پروتئین در توده سلولی استفاده شد.یافته ها: شبیه سازی نتایج با مدل مونود به طور متوسط دارای 92 درصد و برای مدل های موزر و لجستیک به ترتیب 63 و 83 درصد تطابق بودند. با افزایش pH از 3.5 به 6، محتوی پروتئین توده سلولی، 71 درصد افزایش یافت. در دامنه های pH بالاتر از 6 محتوی پروتئین توده سلولی کاهش یافت و در 7.5 pH، 29 درصد کمتر شد. افزایش غلظت اولیه گلوکز از 10 تا 50 گرم در لیتر، تاثیر قابل توجهی بر محتوی پروتئین توده سلولی نداشت. همچنین در محیط کشت محتوی 50 گرم در لیتر گلوکز، محتوی پروتئین در توده سلولی تنها 5.67 درصد بیشتر از محیط کشت با 10 گرم در لیتر گلوکز بود.نتیجه گیری: با توجه به نتایج به دست آمده در این مطالعه، مدل سینتیکی مونود به عنوان یک مدل مناسب برای شبیه سازی رفتار قارچ آسپرژیلوس نایجر پیشنهاد می گردد. pH محیط کشت بر محتوی پروتئین های تک یاخته در توده سلولی موثر است. اما غلظت اولیه گلوکز در محیط کشت قارچ، تاثیری بر میزان تولید پروتئین های تک یاخته ندارد.

سابقه و هدف: سوربیتول یک پلی الکل شش کربنه است و خاصیت شیرین کنندگی و محلولیت بالای آن موجب شده تا از این پلی-اُل در صنایع غذایی به عنوان یک پیش ماده در تولید بسیاری از محصولات استفاده شود. امروزه تولید میکروبی سوربیتول به دلیل شرایط مناسب واکنش تخمیری، مقرون به صرفه بودن تولید آن و مشکلات محیطی ناچیز مورد توجه قرار گرفته است. این مطالعه با هدف بررسی تولید سوربیتول از سوکروز، توسط سویه مخمری دبرومایسس هانسنئی جداسازی شده از طبیعت انجام شد. مواد و روش ها: به منظور جداسازی سویه مخمری تولید کننده سوربیتول از محیط کشت حاوی 40 درصد گلوکز و 1 درصد عصاره مخمر استفاده گردید. پس از شناسایی مخمر با استفاده از تعیین توالی ژنITS ، چگونگی تخمیر و تولید سوربیتول از سوکروز مورد مطالعه قرار گرفت. سوربیتول تولید شده با روش های آنالیزی کروماتوگرافی لایه نازک، رنگ سنجی و کیت مگازایم مورد مطالعه کیفی و کمی قرار گرفت. یافته ها: سویه مخمری تولید کننده سوربیتول، از گرده گل پنیرک جداسازی شد و به عنوان دبرومایسس هانسنئی شناسایی گردید. این سویه مخمری در محیط حاوی 150 گرم بر لیتر سوکروز، پس از پنج روز میزان 5.23 گرم بر لیتر سوربیتول تولید نمود. نتیجه گیری: در این بررسی سوربیتول توسط سویه مخمری دبرومایسس هانسنئی جداسازی شده از طبیعت تولید شد. با توجه به راندمان خوب تولید سوربیتول از سوکروز توسط مخمر، جداسازی مخمرهای بومی مولد سوربیتول و بهینه سازی شرایط تولید آن ها از اهمیت بسزایی برخوردار است.

مایکوتوکسین ها متابولیت های ثانویه ای هستند که عمدتا توسط گونه هایی از قارچ های آسپرژیلوس، فوزاریوم و پنی سیلیوم تولید می شوند. از این میان سهم گونه های آسپرژیلوس قابل توجه می باشد. این مطالعه با هدف جداسازی و شناسایی عوامل قارچی توکسین زا از مواد دانه ای پرمصرف انبارشده در سیلوهای شهر کرمان انجام گردید. این پژوهش به صورت بنیادی و تجربی بر روی 83 نمونه، گندم و ذرت موجود در واحدهای نگهداری رسمی انجام شد. به منظور غربالگری از محیط های سابرودکستروز آگار، سابرودکستروز آگار همراه با کلرامفنیکل و PDA استفاده شد. شناسایی سویه های جداسازی شده بر اساس ویژگی های مورفولوژیک انجام پذیرفت. تشخیص سموم قارچی نیز با روش کروماتوگرافی مایع در فشار بالا (HPLC) انجام گرفت. از میان 83 نمونه، 37 درصد آلودگی مربوط به جنس آسپرژیلوس بود. گونه آسپرژیلوس فلاووس با 14 درصد دارای بیشترین فراوانی در میان گونه های آسپرژیلوس بود. همچنین آفلاتوکسین های B1،B2  و G1 از نمونه های جنس آسپرژیلوس با روش کروماتوگرافی مایع در فشار بالا جداسازی گردید. در مجموع، نتایج این تحقیق نشان دهنده حضور قارچ های توکسین زا، در مواد دانه ای پر مصرف (گندم و ذرت) تحت مطالعه بود. بنابراین باید برنامه ریزی مدونی به منظور کنترل قارچ های یاد شده در مواد دانه ای تدوین گردد.