زمینه: استرپتومایسین یکی از مهم ترین داروهای موثر جهت درمان بیماری سل می باشد که مقاومت به آن به طور فزاینده ای گزارش می شود. شایع ترین موتاسیون های مرتبط با مقاومت به داروی استرپتومایسین در مایکوباکتریوم توبرکلوزیس در کدون های 43 و 83 ژن rpsL (NC_000962.3) اتفاق می افتد. هدف از این مطالعه بررسی تغییرات ژن rpsL در سویه های کلینیکی این باکتری با استفاده از دو آنزیم BsajI و MbooII است.مواد و روش ها: در این مطالعه 71 سویه کلینیکی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس استفاده شد. روش مولکولی PCR-RFLP با دو آنزیم BsajI و MboII جهت تعیین موتاسیون در کدون 43 ژن rpsL، به ترتیب در سویه های مقاوم و حساس، طراحی و نتایج به دست آمده با روش توالی یابی و فنوتیپ سویه ها مقایسه گردید.یافته ها: در این مطالعه از کل سویه های موجود، 25 سویه توسط آنزیم BsajI بررسی شدند که از این تعداد، 64 درصد سویه های مقاوم تشخیص داده شد. 46 سویه نیز توسط آنزیم MboII بررسی و حدود 91 درصد سویه های حساس فاقد موتاسیون تشخیص داده شد. این آنزیم (برخلافBsajI ) برای تشخیص سویه های حساس طراحی شده بود. نتایج توالی یابی انطباق کامل با نتایج PCR-RFLP را نشان داد و وجود جهش در کدون های 43 این ژن را در سویه های مورد مطالعه اثبات نمود.نتیجه گیری: نتایج مطالعه حاضر نشان می دهد که روش RFLP با آنزیم های اندونوکلئازی طراحی شده می تواند به عنوان روشی سریع، ساده و دارای حساسیت بالا برای تمایز سویه های مایکوباکتریوم توبرکلوزیس مقاوم و حساس به استرپتومایسین مورد استفاده قرار گیرد.