مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

مقاله مقاله نشریه

مشخصات مقاله

مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

نسخه انگلیسی

مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

video

مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

sound

مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

نسخه انگلیسی

مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

بازدید:

567
مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

دانلود:

683
مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

استناد:

اطلاعات مقاله نشریه

عنوان

کلونینگ، بیان و تخلیص اندونوکلئاز CEL I نوترکیب در رده سلولی HEK293T

صفحات

 صفحه شروع 473 | صفحه پایان 481

چکیده

 اندونوکلئاز CEL I, آنزیمی از خانواده S1 اندونوکلئازها است. این آنزیم, با اختصاصیت بالا, توانایی شناسایی انواع جهش ها و جایگزینی بازها در مولکول DNA را دارد که این امر اهمیت آن را در قالب محصولات تجاری به منظور مصارف تحقیقاتی و آزمایشگاه های بالینی دوچندان می کند. اگرچه این آنزیم در گیاه کرفس یافت می شود اما به دلیل زمان بربودن فرآیند استخراج و همچنین بازدهی کم محصول نهایی, استخراج آن مقرون به صرفه نیست. علاوه بر این, با توجه به لزوم اعمال تغییرات پس از ترجمه برای دست یابی به ساختار فعال نهایی, تاکنون گزارشی مبنی بر بیان فرم فعال این آنزیم در میزبان های باکتریایی مشاهده نشده است. بنابراین یکی از منابع تولید فرم فعال این آنزیم, کلون و بیان آن در میزبان های یوکاریوتی از جمله مخمر و رده های سلولی پستانداران است. در این مطالعه, توالی ژن به منظور بیان در میزبان یوکاریوتی HEK293T بهینه سازی و سنتز شد. سپس توسط هضم دوگانه با آنزیم های KpnI و XhoI در وکتور بیانی pBudCE4. 1 ساب کلون شد. سازه بیانی مورد نظر توسط لیپوفکتامین به رده سلولی HEK293T ترانسفکت و بیان پروتئین نوترکیب از طریق روش های متعددی از جمله SDS-PAGE, الایزا, واکنش نسخه برداری معکوس و وسترن بلات تایید شد. آنالیز داده های SDS-PAGE و وسترن بلات وزن مولکولی در حدود 30کیلو دالتون را تایید کرد. تخلیص با ستون حاوی رزین Ni-NTA انجام و مقدار پروتئین در حدود 0/2میلی گرم بر میلی لیتر تعیین غلظت شد. درنهایت فعالیت اندونوکلئازی آنزیم, روی DNA هترودوپلکس حاصل از محصول PCR ژن جهش یافته و وحشی بررسی شد. نتایج نشان داد که بیان این پروتئین در میزبان HEK293T فعالیت مناسبی دارد.

استنادها

  • ثبت نشده است.
  • ارجاعات

  • ثبت نشده است.
  • استناددهی

    APA: کپی

    عسکری، سودابه، حسن نیا، صادق، حسن ساجدی، رضا، و یاسایی، وحیدرضا. (1398). کلونینگ, بیان و تخلیص اندونوکلئاز CEL I نوترکیب در رده سلولی HEK293T. زیست فناوری، 10(3 )، 473-481. SID. https://sid.ir/paper/231346/fa

    Vancouver: کپی

    عسکری سودابه، حسن نیا صادق، حسن ساجدی رضا، یاسایی وحیدرضا. کلونینگ, بیان و تخلیص اندونوکلئاز CEL I نوترکیب در رده سلولی HEK293T. زیست فناوری[Internet]. 1398؛10(3 ):473-481. Available from: https://sid.ir/paper/231346/fa

    IEEE: کپی

    سودابه عسکری، صادق حسن نیا، رضا حسن ساجدی، و وحیدرضا یاسایی، “کلونینگ, بیان و تخلیص اندونوکلئاز CEL I نوترکیب در رده سلولی HEK293T،” زیست فناوری، vol. 10، no. 3 ، pp. 473–481، 1398، [Online]. Available: https://sid.ir/paper/231346/fa

    مقالات مرتبط نشریه ای

    مقالات مرتبط همایشی

  • ثبت نشده است.
  • طرح های مرتبط

  • ثبت نشده است.
  • کارگاه های پیشنهادی






    بازگشت به بالا
    telegram sharing button
    whatsapp sharing button
    linkedin sharing button
    twitter sharing button
    email sharing button
    email sharing button
    email sharing button
    sharethis sharing button