مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

نسخه انگلیسی
Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

video

Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

sound

Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

نسخه انگلیسی

Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

بازدید:

1,150
Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

دانلود:

537
Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

استناد:

اطلاعات مقاله نشریه

عنوان

استفاده از پروتئین های نوترکیب به هم پیوسته در ابداع یک سیستم نو به منظور شناسایی پروتئازهای سیتوپلاسمی جدید

صفحات

 صفحه شروع 29 | صفحه پایان 36

چکیده

 زمینه و اهداف: با توجه به اهمیت و نقشی که اندوپروتئازها در فیزیولوژی سلولی و ایجاد بیماری ها دارند و با عنایت به اینکه تاکنون تعداد معدودی از پروتئازهای جایگاه گزین شناخته شده اند, ابداع روش بیولوژیک تکرارپذیر و قابل اعتمادی که شناسایی اندوپروتئازهای جایگاه گزین را میسر سازد, از اهمیت بسزایی برخوردار خواهد بود. بر این اساس در تحقیق حاضر با به کارگیری پروتئین های نوترکیب به هم پیوسته سیستم بیولوژیک جدیدی جهت شناسایی پروتئازهای سیتوپلاسمی جایگاه گزین ابداع گردید. برای ابداع سیستم موردنظر از ترکیب عملکرد دو پروتئین نوترکیب GAL4-VP16 و HSV.tk-Zeo استفاده شد. روش بررسی: برای ساختن وکتورها از روش های بیولوژی مولکولی استفاده شد. وکتورهای ساخته شده توسط باکتری های پذیرا تکثیر داده شدند و جهت بررسی کارآیی آنها از سلول های HeLa استفاده شد. بدین منظور سلول های حیوانی با وکتورهای ساخته شده ترانسفکت و تکثیر داده شدند. سپس با استفاده از آزمایش MTT حساسیت سلول ها به داروها مطالعه شد. یافته ها: سلول های HeLa با وکتور pcDBHZm که حاوی کاست القاپذیر HSV.tk-Zeo بود, ترانسفکت شده و با داروی G418 انتخاب و تکثیر داده شدند. سپس سلول های ترانسفکت شده با پلاسمید pcDBHZm مجددا با پلاسمید دگیری به نام pcG4VP16, که طی این مطالعه ساخته شده بود, ترانسفکت شدند. در این مرحله, حساسیت دو نوع سلول ترانسفکت شده نسبت به داروی GCV, در مقایسه با سلول های ترانسفکت نشده (کنترل منفی) و سلول های ترانسفکت شده با پلاسمید pCCI (کنترل مثبت) ارزیابی شد. نتایج به دست آمده نشان داد که سلول های ترانسفکت شده با pcDBHZm حدود 30 برابر مقاوم تر از سلول های pcDBHZm+pG4VP16 به GCV بودند. متعاقب اثبات این امر, پلاسمید pcG4mVP ساخته شد. در این پلاسمید محل برش چند آنزیم محدودگر ما بین قطعه نوکلئوتیدی GAL4 و VP16 ایجاد شد تا امکان قرار دادن کتابخانه نوکلئوتیدی یا توالی های مشخص را فراهم آورد که به ترتیب برای شناسایی پروتئازهای جدید و بررسی وجود پروتئازهای شناخته شده در سلول های مختلف مورد استفاده قرار می گیرد. نتیجه گیری: نتایج به دست آمده موید کارکرد سیستم ابداع شده بود. بدین صورت که در سیستم ابداع شده, بیان کاست HSV.tk-Zeo تحت کنترل پروتئین مرکب GAL4-VP16 بوده و در حضور این پروتئین, cDNA های مزبور بیان می شوند. بیان کاست مزبور حساسیت سلول ها به GCV را در مقایسه با موقعی که GAL4-VP16 در سلول ها غیر فعال است, حدود 30 برابر افزایش می دهد و باعث کشته شدن سلول های محتوی GAL4-VP16 فعال در حضور GCV می شود (انتخاب منفی). این امر امکان جداسازی سلول های محتوی GAL4-VP16 غیر فعال (متعاقب هضم آنزیمی پروتئین مزبور) از سلول های محتوی GAL4-VP16 فعال (به دلیل عدم هضم آنزیمی پروتئین مزبور) را در حضور GCV میسر می سازد

استنادها

  • ثبت نشده است.

    • ارجاعات

  • ثبت نشده است.

    • استناددهی

    APA: کپی

    حجازی، محمدسعید، گیکن، یوپ، و فرزانه، فرزین. (1384). استفاده از پروتئین های نوترکیب به هم پیوسته در ابداع یک سیستم نو به منظور شناسایی پروتئازهای سیتوپلاسمی جدید . مجله پزشکی دانشگاه علوم پزشکی تبریز، 27(2)، 29-36. SID. https://sid.ir/paper/47139/fa

    Vancouver: کپی

    حجازی محمدسعید، گیکن یوپ، فرزانه فرزین. استفاده از پروتئین های نوترکیب به هم پیوسته در ابداع یک سیستم نو به منظور شناسایی پروتئازهای سیتوپلاسمی جدید . مجله پزشکی دانشگاه علوم پزشکی تبریز[Internet]. 1384؛27(2):29-36. Available from: https://sid.ir/paper/47139/fa

    IEEE: کپی

    محمدسعید حجازی، یوپ گیکن، و فرزین فرزانه، “استفاده از پروتئین های نوترکیب به هم پیوسته در ابداع یک سیستم نو به منظور شناسایی پروتئازهای سیتوپلاسمی جدید ،” مجله پزشکی دانشگاه علوم پزشکی تبریز، vol. 27، no. 2، pp. 29–36، 1384، [Online]. Available: https://sid.ir/paper/47139/fa

    مقالات مرتبط نشریه ای

    مقالات مرتبط همایشی

  • ثبت نشده است.

    • طرح های مرتبط

  • ثبت نشده است.

    • کارگاه های پیشنهادی






    بازگشت به بالا