سابقه و هدف: آنتی ژن RhD در ایجاد بیماری های همولیتیک نوزادان نقش مهمی دارد و از آن جایی که تعیین RhD جنین با استفاده از روش های تهاجمی مانند آمنیوسنتز، خطراتی را برای مادر و جنین به دنبال خواهد داشت، در این پژوهش تلاش گردید تا ژنوتایپ RhD جنین از DNA آزاد جنینی موجود در سرم مادران باردار، به صورت غیر تهاجمی و با استفاده از روش Hemi-nested PCR تعیین گردد. مواد و روش ها: مطالعه انجام شده از نوع تجربی (experimental) بود. نمونه های خون 45 مادر باردار RhD - منفی که همسر RhD - مثبت داشتند جمع آوری شد و DNA آزاد سرم آن ها با روش فنل کلروفرم استخراج گردید. با استفاده از آغازگرهای اختصاصی و در دو دور PCR، قطعه ای از اگزون 10 ژن RhD تکثیر شد. برای تایید نتایج منفی حاصله بر روی نمونه های مادران باردار حامل جنین RhD - منفی، با استفاده از آغازگرهای اختصاصی قطعه ای از ژن دیگری به نام RhCE تکثیرگردید. یافته ها: پس از تولد، پیگیری انجام شده در ردیابی نتایج سرولوژیکی بند ناف نوزادان و ارزیابی نتایج حاصل از این پژوهش مشخص نمود که در 37 مورد از 41 نمونه قابل پیگیری، RhD جنین به میزان 45/95% به درستی تعیین شده  است. نتایج مربوط به 4 نمونه باقیمانده شامل یک مورد منفی کاذب و سه مورد مثبت کاذب بوده  است. نتیجه گیری: این پژوهش نشان داد که برای تشخیص پیش از تولد گروه خونی RhD جنین به روش غیر تهاجمی و با کمترین احتمال خطر برای نوزاد، نمونه های سرمی مادران بسیار مناسب است. در این ارتباط استفاده از روش های جدید و حساس مولکولی مانند روش Hemi-nested PCR و به دست آوردن درصد بالایی از میزان تشخیص ژنوتایپ RhD این امیدواری را به ارمغان می آورد که با حذف تمام عوامل مداخله گر و تکمیل این روش، می توان این تشخیص را با اطمینان بالایی در کلینیک به کار برد.