متن کامل این مقاله به زبان انگلیسی می باشد، لطفا برای مشاهده مقاله به متن کامل مراجعه فرمایید.

لطفا برای مشاهده چکیده به متن کامل (PDF) مراجعه فرمایید.

متن کامل این مقاله به زبان انگلیسی می باشد، لطفا برای مشاهده مقاله به متن کامل مراجعه فرمایید.

IDO یک آنزیم درون سلولی است که توسط برخی از سلول ها نظیر سلول های عرضه کننده آنتی ژن و سلول های اندوکرین و سیستم عصبی بیان می شود. مکانیسم اصلی عملکرد IDO تجزیه تریپتوفان و محروم نمودن سلول های وابسته از این اسیدآمینه ضروری می باشد. بدین ترتیب سلول های وابسته به آن از جمله لنفوسیت های T در غیاب تریپتوفان تکثیر نیافته و دچار آپوپتوز می شوند. با توجه به نقش مهم تریپتوفان در تکثیر سلول های T، این احتمال وجود دارد که بیان IDO در سطح تماس مادر جنین از طریق کاتابولیسم تریپتوفان و سرکوب پاسخ لنفوسیتهای T به بقا جنین نیمه بیگانه کمک نماید. به همین منظور در این مطالعه بیان آنزیم IDO در فازهای مختلف سیکل استروس موش شامل پرواستروس، استروس، مت استروس و دی استروس به روش PCR-RT بررسی شده و میزان بیان ژن در فازهای مذکور مقایسه گردیده است. فازهای سیکل استروس از طریق مطالعه بررسی سیتولوژی اسمیر واژینال و رنگ آمیزی پاپا نیکولا تعیین گردیدند. در هر فاز، بافت آندومتر جهت استخراج RNA در محلول RNA،  cDNقرار داده شد. پس از استخراج RNA، cDNA با استفاده از آنزیم Reverse Transcriptase ساخته شد. در این نمونه ها، ژن IDO و mGAPDH به عنوان ژن House keeping به روش PDR-RT با استفاده ازپرایمرهای اختصاصی تکثیر گردید. ویژگی واکنش IDO-PCR از طریق هضم آنزیمی قطعه تکثیر یافته به دو قطعه 138 و 259 جفت باز تایید گردید. محصولات PCR ژن های mGAPDH و IDO به طور همزمان در چاهک ژل آگارز بارگذاری شد. دانسیته باندهای دو ژن مذکور با استفاده از نرم افزار Lab works اندازه گیری و نسبت دانسیته باند IDO به mGAPDH برای هر موش محاسبه گردید. به عنوان کنترل مثبت بیان IDO، ماکروفاژهای صفاقی و سلول های دندریتیک طحالی موش تخلیص و پس از تیمار با IFNγ، بیان ژن IDO به روش مذکور مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج حاصل نظریه مربوط به نقش IDO را در سیستم ایمنی ذاتی کانال تولید مثل در حفاظت از عفونت تایید می کند. همچنین با توجه به اینکه در موش ها آمیزش جنسی فقط در فاز استروس انجام می شود، بیان سطح بالای آنزیم IDO در این فاز می تواند به عنوان یک مکانیزم اصلی در القای تحمل ایمونولوژیک مادر علیه جنین مطرح باشد.

Inhibin یکی از فاکتورهای مترشحه از سلول های گرانولوزا در زنان و سرتولی در مردان است که نقش مهمی را در تنظیم ترشح FSH از هیپوفیز به عهده دارد. امروزه سنجش اندازه گیری Inhibin در سرم و سایر مایعات بیولوژیک کمک شایانی در ارزیابی میزان تولید سلول های ژرمینال و وضعیت باروری در هر دو جنس می کند، به طوری که میزان آن در سرم و مایع سمینال مردان معرف وضعیت تولید اسپرم در بیضه ها است و میزان آن در سرم زنان معرف وضعیت تخمک گذاری می باشد. لذا اندازه گیری Inhibin در طی مراحل مختلف درمان ناباروری ابزاری ارزشمند جهت ارزیابی میزان موفقیت درمان است. محققین، به دنبال پی بردن به اهمیت و نقش ارزنده این فاکتور، شروع به طراحی روش اندازه گیری کمی آن نموده اند. در این مطالعه هدف تولید پروتئین Inhibin بود. به منظور تولید پروتئین inhibin، cDNA مربوط به زیر واحد Inhibin α تهیه گردید و با طراحی پرایمرهای اختصاصی که حاوی سایت های برش آنزیم های برش دهنده مناسب می باشند این cDNA با روش PCR تکثیر و در وکتورهای بیان باکتریایی کلون گردید. کلون مثبت با استفاده از DNA Sequencing مورد تایید قرار گرفت و آماده ترانسفورماسیون به داخل سلول های باکتریایی مناسب برای بیان پروتئین نوترکیب شد. به طور هم زمان قطعه DNA مزبور در وکتورهای بیان مخصوص در مخمر Pichia pastoris (پیکیا پاستوریس) کلون گردید. به دلیل کمبود میزان پروتئین نوترکیب تولید شده این ژن در وکتور باکتریایی 19b-PET کلون شد. برای بررسی بیان پروتئین نوترکیب فوق از سلول های RP-BL21 و RIL-BL21 استفاده شد. پس از مشاهده بیان این پروتئین با استفاده از ژل SDS PAGE و همچنین روش Western Blot اقدام به تخلیص آن شد. مراحل تخلیص پروتئین مربوط با استفاده از ستون کروماتوگرافی affinity با یون Ni2+ صورت گرفت. آنگاه به وسیله ژل SDS PAGE از حضور آن اطمینان حاصل شد. میزان پروتئین به دست آمده با روش برادفورد اندازه گیری و گزارش گردید.

PCOS بیماری است که زنان در دوره باروری به آن مبتلا می شوند. عامل ایجاد کننده این سندرم تاکنون ناشناخته باقی مانده است. بعضی از تحقیقات عامل وراثت و پاره ای دیگر عوامل محیطی مختلف را علت این بیماری می دانند. طرح حاضر مطالعه ای توصیفی تحلیلی است که برای کنترل عامل وراثت بر روی دوقلوهای تک تخمکی (منوزیگوت) به عنوان افراد یکسان از نظر ژنی و دوقلوهای دو تخمکی (دی زیگوت) با شباهت ژنی افراد یک خانواده به یکدیگر انجام شد. طرح در 7 مرحله انجام گرفت که شامل مطالعات اولیه، تهیه پرسشنامه، نمونه گیری، انجام آزمایش ها، مرور اطلاعات و تجزیه و تحلیل داده ها و چاپ و نشر اطلاعات بود. پس از اتمام مطالعات اولیه برای اطلاع رسانی و جذب داوطلب از میان دوقلوهای ساکن شهر تهران پوستر طرح در مراکز دانشگاه، دبیرستانهای دخترانه، مراکز بهداشتی درمانی نصب شد که پس از تماس اولیه داوطلبین، برای انجام مصاحبه، سونوگرافی و نمونه گیری به پژوهشکده ابن سینا دعوت شدند. پس از اتمام مرحله نمونه گیری بر اساس علائم بالینی، نتیجه سونوگرافی و آزمایش های هورمونی (10نوع آزمایش هورمونی) وضعیت داوطلبین از نظر ابتلا به PCOS تعیین شد. نمونه های طرح 154 نفر (77 جفت) بودند که 96 نفر آنها (48 جفت) دوقلوی تک تخمکی و 58 نفر آنها (29 جفت) دوقلوی دو تخمکی بودند. نتایج نشان داد همانطور که در مطالعات قبلی نیز به آن اشاره شده است، در ایجاد PCOS عوامل محیطی علاوه بر عوامل ژنتیکی نقش دارند و این بیماری ناشی از نقص تک ژنی نیست. سطح سرمی لپتین توسط عوامل ژنتیک تعیین می شود و مقدار آن در پژوهش حاضر در مبتلایان به PCOS و غیر مبتلایان تفاوتی نداشت. با شناخت عوامل محیطی، این بیماری قابل پیشگیری خواهد بود.

آنتی بادی های پلی کلونال توسط کلون های متعددی از لنفوسیت های B تولید و به اپی توپ های گوناگون متصل می گردند. آنتی بادی های پلی کلونال از جهات مختلف از جمله از نظر ایزوتیپ، ایدیوتیپ، ویژگی و میل پیوندی (افینیتی) ناهمگن هستند. آنتی بادی های پلی کلونال توسط کلون های متعددی از لنفوسیت های B تولید و به اپی توپ های گوناگون متصل می گردند. آنتی بادی های پلی کلونال از جهات مختلف از جمله از نظر ایزوتیپ، ایدیوتیپ، ویژگی و میل پیوندی (افینیتی) ناهمگن هستند. در این مطالعه بر علیه ایزوتیپ های IgA, IgM, IgD و IgG انسان و زنجیره های سبک Kappa و Lambda، و بر علیه ایمونوگلوبولین موش، خرگوش و گوسفند مشتمل بر 42 فرآورده آنتی بادی پلی کلونال در گوسفند و یا در خرگوش تولید و سپس آنتی بادی های تولیدشده با آنزیم HRP و ماده فلورسانس FITC کونژوگه گردیدند. به منظور دستیابی به IgM, IgA, IgD و IgG و ایمونوگلوبولین انسان از سرم بیماران مبتلا به ملیوممولتیپل و والدنشتروم و یا سرم نرمال و برای ایمونوگلوبولین حیوانات از سرم آنها استفاده شد. وجود پاراپروتئین با الکتروفورز استات سلولز و نوع ایزوتیپ پاراپروتئین با آزمون الایزا بررسی شد. از آنجا که مطلبق با نتایج الایزا، پاراپروتئین IgM و IgA مورد مطالعه به پروتئین A استافیلوکوکی متصل می شد، برای تصفیه آن، از روش جدید کروماتوگرافی متشکل از ستون های جذبی پروتئین G استرپتوکوکی و پروتئین A استافیلوکوکی استفاده گردید. IgG موجود در سرم با ستون پروتئین G گرفته شد و IgM یا IgA به ستون پروتئین A متصل گردید. برای تصفیه IgD از ستون کروماتوگرافی تعویض یونی با رزین DEAE استفاده شد. فراکسیون های حاوی IgD، جهت حذف IgG، از ستون پروتئین A گذشتند و فراکسیون های غیرمتصل به ستون پروتئین A از ستون سفادکس G-100 عبور داده شدند. بر این اساس مولکول IgD با پیک اول از ستون ژل فیلتراسیون خارج گردید. IgG انسان با پروتئین G و ایمونوگلوبولین حیوانات با ستون پروتئین A تخلیص گردید. خلوص تمام فراکسیون ها با آزمون الایزا و SDS-PAGE مورد ارزیابی قرار گرفت. خلوص IgM تصفیه شده با آزمون ایمونوبلات نیز تایید شد. برای احیا باندهای دی سولفید بین دو زنجیره سبک و سنگین ایمونوگلوبولین های انسان از ماده احیا کننده در تیوتریتول (DTT) استفاده گردید.زنجیره های سبک (Lambda, Kappa) و سنگین ایمونوگلوبین ها با استفاده از روش الکتروالوشن تصفیه شدند. خلوص زنجیره ها با استفاده از آزمون الایزا- و SDS-PAEG تایید گردید. زنجیره های سنگین و سبک تصفیه شده با روش الکتروالوشن به عنوان آنتی ژن برای تزریق به حیوانات در نظر گرفته شدند. 250 میکروگرم آنتی ژن برای هر خرگوش و 1میلی گرم آنتی ژن به گوسفند در ادجوانت کامل فروند و در تزریق اول و نصف مقادیر ذکر شده در ادجوانت ناقص فروند در تزریقات بعدی، استفاده شد. جمعا 5 تزریق انجام شد و فاصله تزریق اول تا دوم سه هفته و فاصله بقیه تزریقات دو هفته بود. تیتر آنتی بادی های اختصاصی از خونگیری اول (Pre-immune) تا خونگیری ششم با آزمون الایزای غیرمستقیم بررسی شد و نشان داده شد که با اولین تزریق تیتر آنتی بادی در هر دو گونه بالا رفته است که این میزان در گوسفند بیشتر از خرگوش است. تیتر آنتی بادی های تولید شده با کروماتوگرافی جذبی با آنتی ژن ویژه خود، تصفیه شد. در مواردی، واکنش متقاطع آنتی بادی ها با کروماتوگرافی جذبی حذف گردید. همچنین قطعه F(ab) 2 با استفاده از آنزیم پپسین تولید گردید و به تفکیک با آنزیم پراکسیداز و فلورسئین ایزوتیوسیانات (FITC) متصل گردیدند. واکنش متقاطع کونژوگه های آنزیمی با سایر ایمونوگلوبین ها، زنجیره های سنگین آنها و زنجیره های سبک κ و λ و همچنین با پانل سرم یازده حیوان مختلف مورد ارزیابی قرار گرفت. کونژوگه های فلورسانس ضد IgM و IgD و ضد ایمونوگلوبولین انسان با سلول های کونژوگه های ضد IgA با سلول B27، کونژوگه های ضد ایمونوگلوبولین موش با لنفوسیت موش مجاور شدند و تعداد سلول های رنگ گرفته با دستگاه فلوسایتومتری (FACS) و میکروسکوپ فلورسانس شمارش گردیدند. نتایج نشان دهنده شباهتکونژوگه های فلورسانس تولید شده با کونژوگه تجاری است. تمامی 42 فرآورده موفق به اخذ تاییدیه آزمایشگاه رفرانس وزارت بهداشت، درمان و آموزش پزشکی شده اند.

انجماد شاخه ای از علم اکرایوبیولوژی است که به منظور حفظ و نگهداری طولانی مدت سلول در شرایط حرارت بسیار پایین صورت می گیرد. انجماد اسپرم به طور معمول در مراکز باروری و آزمایشگاه های آندرولوژی انجام می شود. با توجه به اینکه روند انجماد، سبب کاهش عملکرد و ظرفیت باروری اسپرم ها می گردد، چند سالی است که ارزیابی روش ها و محیط های مختلف انجماد جهت بررسی تاثیر آنها در تحریک اسپرم انجام گرفته است. با وجود این هرگز بهترین محیط جهت انجماد اسپرم شناخته نشده و هیچ روش استاندارد انجماد اسپرم بنا نشده است. لذا بنا کردن تکنیک مناسب انجماد و نیز استفاده از محیط مناسب انجماد بر اساس یافته های تجربی بسیار ضروری به نظر می رسد. بنابراین، هدف اصلی این مطالعه بررسی میزان بقا و تحرک اسپرم طی روند انجماد به کمک سه محیط مختلف انجماد شامل (Yolk-Buffer) TYB-G Test- , HSPM (Human Sperm Preservation Medium) و (GEYC) Glycerol Egg Yolk Citrate با دو روش مختلف انجماد شامل روش دستگاهی (برنامه ریزی شده) و روش غیردستگاهی (استفاده از فاز بخار ازت مایع) است.

با توجه به تاثیر عوامل مختلف در کاهش میزان باروری از یک سو و آمار قابل توجه زوج های نابارور (15-10 درصد) از سوی دیگر، آگاهی از دیدگاه شاغلین در زمینه ناباروری در ایران نسبت به اهمیت و شیوع عوامل محیطی ایجاد کننده ناباروری و بهره مندی از نتایج آن در طراحی برنامه های علمی- پژوهشی مناسب اهمیت ویژه ای دارد. همچنین، عدم وجود آمارهای دقیق درباره میزان تاثیر شیوع عوامل محیطی بر باروری در ایران و ضرورت اجرای این طرح به عنوان قدم اول در این زمینه، تاکید می نماید. هدف: تعیین میزان اهمیت و شیوع عوامل مختلف ایجاد کننده ناباروری از دیدگاه شاغلین در این زمینه در ایران و نهادینه نمودن پرسش در مورد مواجهه بیماران با عوامل محیطی موثر در ایجاد ناباروری در هنگام اخذ شرح بالینی (HX). روش: ارسال پرسشنامه به مراکز درمان ناباروری فعال کشور و مراکز آموزشی درمانی دارای بخش های زنان و زایمان و اورولوژی. نتایج و بحث: در مجموع 369 پرسشنامه تکمیل شده از 12 مرکز درمان ناباروری و 12 مرکز آموزش درمانی دریافت شد که 24.9% میزان تاثیر عوامل محیطی بر باروری را در حد زیاد، 51.1% در حد متوسط 22.7% در حد کم و 1.3% بدون تاثیر دانستند. پر اهمیت ترین و شایع ترین عوامل موثر از دیدگاه شرکت کنندگان در طرح عبارت بودند از: 1- سلاح های شیمیایی 2- مواد رادیواکتیو و تشعشعات 3- مختل کننده های آندوکرین (برحسب اهمیت) 1- سلاح های شیمیایی 2- استرس های محیطی 3- مواد مخدر (برحسب شیوع) میانگین سابقه فعالیت تخصصی شرکت کنندگان در این پژوهش 7.5 سال بود و 52.5% از متخصصین زنان و زایمان و 58.3% از متخصصین اورولوژی با زوج ناباروری که زمینه اصلی مشکل آنها عوامل محیطی بوده، برخورد داشته اند. در مجموع تنها 5% از کل شرکت کنندگان در این نظرسنجی با تحقیقات انجام شده در ایران در زمینه نقش عوامل محیطی در ایجاد ناباروری برخورد داشته اند که این میزان در متخصصین زنان و زایمان 7.7% ودر متخصصین ارولوژی 10% بود. در مجموع تاکید بر اهمیت تاثیر عوامل محیطی در ایجاد ناباروری از دیدگاه شاغلین در ایران وعدم برخورد ایشان با مطالعات و پژوهش های انجام شده در سطح کشور موید ضرورت برگزاری همایشی در این زمینه جهت جمع آوری فعالیت های انجام شده و ارائه راهکارهای مناسب در زمینه شناخت، پیشگیری و درمان ناباروری ناشی از عوامل محیطی است.

برای این طرح تعداد 12 مجله علمی با نظر شورای علمی پژوهشکده انتخاب شدند و با همکاری اعضاء پژوهشکده فایل های PDF این مجلات در حد امکان از سایت های مربوط تهیه گردید. سپس بانک اطلاعاتی لازم با فرمت RDBMS تهیه شد و اطلاعات مربوطه به مقالات در این بانک اطلاعاتی وارد گردید. این اطلاعات شامل نام مجله، سال نشر، شماره سریال، صفحه مقالات، عنوان و نام نویسندگان مقالات است. تعداد مقاله های وارد شده بیش از 14000 مورد بود. در مرحله بعدی، با استفاده از روش DSN این فایل در دسترس نرم افزار IIS سرور مرکز قرار گرفت و با طراحی صفحات وب به زبان ASP امکان استفاده از این اطلاعات به صورت لیست و جستجوی کلمه ای از طریق وب پژوهشکده میسر شد. در آخرین قسمت با استفاده از پروتکل های امنیتی مناسب سطوح دسترسی به اطلاعات فوق به کمک روش Windows Authentication تنظیم گردید تا امکان استفاده از این اطلاعات برای کاربران مورد نظر فراهم گردد.