مقاله پژوهشی
مقدمه: مطالعات بالینی نشان داده است که مصرف همزمان دو مهارکننده ی مختلف نقاط وارسی ایمنی، نیولومب و ایپیلیمومب، به صورت معنی داری ایمنی و کارآیی درمانی بهتری در مقایسه با مصرف هر کدام به تنهایی داشته است. دیابادی ها آنتی بادی های مهندسی شده با اختصاصیت دوگانه هستند که همزمان دو آنتی ژن مختلف را مورد هدف قرار می دهند و می توان آن ها را در سیستم بیان باکتریایی تولید کرد. هدف مطالعه ی حاضر، تولید یک دیابادی جدید برای هدف قرار دادن همزمان دو نقطه ی وارسی سیستم ایمنی در فضای پری پلاسم باکتری اشرشیا کولای بود.
روش ها: توالی آمینو اسید دیابادی بر اساس نواحی متغیر آنتی بادی های نیولومب و ایپیلیمومب طراحی شد و کد ژنتیکی آن برای بیان در سیستم باکتری بهینه سازی و بعد از ساخت شیمیایی در پلاسمید، pET-22b وارد گردید. بیان پروتئین در باکتری ای کولای BL21 (DE3) در دماها و غلظت های مختلف القاگر انجام شد. بعد از استخراج پروتئین پری پلاسمیک، خالص سازی دیابادی با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی نیکل انجام گردید.
یافته ها: نتایج SDS-PAGE بیان پروتئین با وزن حدود 55 کیلودالتون را تأیید کرد. بیشترین میزان پروتئین محلول در دمای 23 درجه ی سانتی گراد و غلظت 1 میلی مولار القاگر (IPTG) حاصل شد. پروتئین محلول بیان شده توسط کروماتوکرافی تمایلی با خلوص بالای 90 درصد با موفقیت خالص سازی شد.
نتیجه گیری: نتایج مطالعه ی ما نشان داد که بهینه سازی شرایط بیان، می تواند منجر به بهبود بیان محلول پروتئین های مشابه در فضای پری پلاسمیک شود.