فیلترها/جستجو در نتایج    

فیلترها

سال

بانک‌ها




گروه تخصصی








متن کامل


کارفرما: 

جهاد دانشگاهی

اطلاعات : 
  • تاریخ پایان: 

    بهمن 1388
تعامل: 
  • بازدید: 

    735
کلیدواژه: 
چکیده: 

این دهه دوران تحقیقات در زمینه پساژنومی است و اگرچه اغلب بانک های ژنومی مملو از اطلاعات ژنتیکی موجودات مختلف است، هنوز عملکرد و محصولات اغلب ژن ها ناشناخته است. امروزه دانش پروتئومیکس پیشرفت شگرفی در زمینه مطالعه فعالیت محصولات ژنی داشته و به عنوان ابزاری توانمند در عرصه درک و شناخت عملکرد ژن ها مد نظر قرار گرفته است. هدف از این بررسی بهینه سازی شرایط لازم جهت تولید پروتئین نوترکیب پراکسیزومی موشی (PEP) در گونه مناسب و مستعد شده از کلی باسیل به نام BL21 بود. پروتئین نوترکیب PEP در مراحل بعد خالص شده و به عنوان بخشی از مطالعات پروتئومیکسی جهت شناسایی اجزای سلولی واکنش دهنده با آن به کار خواهد رفت. در این بررسی وکتور بیان شونده در اشرشیاکلی (pGEX6P2) که در آن ژن PEP در مجاورت ژن GST (گلوتاتیون ـSـ ترانسفراز) دست ورزی و قرار داده شده است به کار گرفته شد. وکتورهای نوترکیب به درون سلول های BL21 که سلول های باکتریائی مناسب جهت بیان پروتئین نوترکیب می باشند، ترانسفورم شدند. سلول های باکتریایی به طور مجزا GST و پروتئین نوترکیب متصل به GST را تحت رقت 2000 برابر در محیط2YT بیان کردند. بعد از 3 ساعت کشت در دمای 37 درجه سانتی گراد، ایزوپروپیل تیوگالاکتوزیداز (IPTG) در غلظت های مختلف به محیط کشت اضافه شد. در گام بعدی کشت باکتری ها در دماهای مختلف تا رسیدن به میزان رشد مناسب بررسی شد. در نهایت مجددا سلول ها در600mL از محلول تریس بافری (Tris (PH: 7.5ـHCL حاوی محلول 1 میلی مولار فنیل متیل سولفونیل فلوراید (PMSF)، در حضور غلظت های مختلف Triton 100-X یا NP40 سوسپانسیونه شدند و سپس سونیکیت شدند. عملکرو سونیکیشن با توان پروب های مختلف اولتراسوند صورت گرفت. لیزات سلولی سانتریفیوژ شده و سوپرناتانت حاصله جمع آوری و با15mL از سوسپانسیون 50% گلوتاتیون سفاروز در 4 درجه سانتی گراد برای 3 ساعت انکوبه شدند. ذرات گلوتاتیون سفاروز 3 برابر با بافر شستشو و در آن مجددا سوسپانسیونه شده و در الکتروفورز SDSـPAGE به کار گرفته شدند. جهت تشخیص و شناسایی باندهای پروتئینی ژن ها با رنگ کوماسی برلیانت (CBB) رنگ آمیزی شدند. بهینه ترین حالت برای بیان ژن و تولید پروتئین نوترکیب PEP در غلظت 0.1mgr/mL از IPTG در کشت شبانه باکتری به دست آمد. ما هیچ تفاوت معنی داری در به کارگیری TritonX100 یا NP40 به عنوان شوینده های حلال گر مشاهده نکردیم، هر چند که بهترین غلظت برای هر دو شوینده 0.1%(V/V) مشخص شد. به علاوه مناسبترین شرایط سونیکاسیون جهت تخریب بقایای دیواره سلولی باکتری 340 پالس در 5 دقیقه باشدت 60% در هر Cycle به دست آمد.

شاخص‌های تعامل:   مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

بازدید 735

نشریه: 

Cell Journal (Yakhteh)

اطلاعات دوره: 
  • سال: 

    2009
  • دوره: 

    11
  • شماره: 

    SUPPL. 1
  • صفحات: 

    110-110
تعامل: 
  • استنادات: 

    0
  • بازدید: 

    256
  • دانلود: 

    0
چکیده: 

Objective: With considering about our extended information in genome sequence field which gathered in genome data banks nowadays discovering the genes function and their products still unclear that’s why study in this area sensed. Proteomics researches are one of the powerful tools for reach to this knowledge.Materials and Methods: In our study at first we prepare competent cells from Escherichia coli species named BL21 for expressing recombinant protein, then in several stages, essential condition for processing recombinant protein, of this sort; change in culture temperature, induction time and concentration of IPTG for protein expression, time and number of sonication pulses for breaks in bacterial membrane and releasing cytosolic contents,at least change in kind and concentration of detergents for eliminate membrane debris were adjusted. All of the results step by step classified and optimized.Results: The optimized concentration of IPTG was 0.1 mM. There was not any significant difference between the used detergents as both of them had the same effect on permeabilization of the bacterial membranes. Finally we detected the recombinant GST-PEP by SDS page analysis with both of Commasie Brilliant Blue staining (CBB) and western blot using anti GST antibody.Conclusion: Taken together these data showed that PEP (peroxisomal protein)which containing fibronectin type III and two hydrophobic domains should be assessed by further proteomics analysis to discover it's interactions with other proteins in neural stem differentiated cells.

شاخص‌های تعامل:   مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

بازدید 256

مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resourcesدانلود 0 مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resourcesاستناد 0 مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resourcesمرجع 0
نشریه: 

Cell Journal (Yakhteh)

اطلاعات دوره: 
  • سال: 

    2008
  • دوره: 

    10
  • شماره: 

    SUPPLEMENT 1
  • صفحات: 

    87-88
تعامل: 
  • استنادات: 

    0
  • بازدید: 

    206
  • دانلود: 

    0
چکیده: 

Objective: Peroxisomes are near-ubiquitous organelles of eukaryotic cells which perform a range of functions. The common metabolic activities of peroxisomes are the oxidation of fatty acids and generation and removal of hydrogen peroxide, but peroxisomes have also been implicated in b-oxidation of aromatic and cyclic compounds, synthesis of plasmalogens, metabolism of purines and pyrimidines, and catabolism of polyamines, D-amino acids and methanol. One of the peroxisomal matrix proteins which have already been cloned termed peroxisomal protein .Amino acid alignment analysis revealed two hydrophobic domains. The First hydrophobic domain comprises twenty amino acid residues between 12-31 residues and the second one, is located at 152-169 residues. There is a triPEPtide (SKI) at carboxy terminus responsible for sorting of this protein to the matrix of peroxisome. There is a fibronectin type III (FnIII) domain between residues 31-114 in PEP. In order to see the importance of above sorting signal, we performed a site-directed mutagenesis to delete SKI triPEPtide, FnIII domain and two hydrophobic domains.Materials and Methods: Amplified mutant PEP cDNA were constructed downstream of EGFP cDNA under regulation of CMV promoter in pEGFP-C1 vector and were send for sequenceResults: After transfection of EGFP-PEP/DSKI cDNA, cytosolic localization of EGFP fluorescency was observed. Transfection of plasmids containing chimera of EGFP-PEP/D 31-114, EGFP-PEP/D 12-31 and EGFPPEP/ D152-169 cDNAs into P19 showed several punctuate structures presumably peroxisomes as merged with the pattern of catalase staining in those cellsConclusion: Taken together, these data strongly suggest that SKI triPEPtide located at the C-terminus of protein is essential for peroxisomal targeting

شاخص‌های تعامل:   مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

بازدید 206

مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resourcesدانلود 0 مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resourcesاستناد 0 مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resourcesمرجع 0
مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources
اطلاعات دوره: 
  • سال: 

    1390
  • دوره: 

    9
  • شماره: 

    2
  • صفحات: 

    2386-2392
تعامل: 
  • استنادات: 

    0
  • بازدید: 

    1170
  • دانلود: 

    299
چکیده: 

پس از گذر از تحقیقات ژنومی و وجود انبوهی از اطلاعات در بانک های ژنومی اینک دوران تحقیقات در زمینه پساژنومی و شناخت محصولات ژنها، چگونگی ارتباطات آنها با یکدیگر و شناخت مسیرهای داخل سلولی با ابزار توانمند پروتئومیکس است. هدف از این بررسی بهینه سازی شرایط لازم جهت تولید پروتئین نوترکیب پراکسیزومی موشی (PEP) در سویه مناسب و مستعد شده از اشرشیاکلی به نام BL21 میباشد. پروتئین نوترکیب PEP در مراحل بعد خالص شده و به عنوان بخشی از مطالعات پروتئومیکسی برای شناسایی اجزاء سلولی واکنش دهنده با آن به کار خواهد رفت.در این بررسی وکتور بیانی پروکاریوتی (pGEX6P2) که در آن cDNA PEP در مجاورت توالی کدکننده GST (گلوتاتیون ترانسفراز) قرار داده شده است، استفاده شد. سلول های باکتریایی سویه BL21 بوسیله این وکتور بیانی ترانسفورم شدند. برای به دست آوردن بالاترین میزان بیان و حلالیت پروتئین، کشت سلولهای باکتریایی در محدوده دمایی 37-20 سانتی گراد ارزیابی شد. همچنین غلظت مناسب IPTG برای القاء بیان با بررسی محدوده 0.1 تا 10 میلی مولار صورت گرفت. پس از به دست آوردن بالاترین میزان بیان در گام بعدی لازم است پروتئین های درون سلولی آزاد شوند، بنابراین با استفاده از امواج اولتراسوند با قدرت ها و در زمان های متفاوت سلول ها لیز و سپس با افزودن شوینده NP40 یا Triton X-100 در غلظت های مختلف، پروتئین های محلول باکتریایی و پروتئین نوترکیب بیان شده، آزاد شدند.بهینه ترین حالت برای بیان ژن و تولید پروتئین نوترکیب PEP در دمای 20oC و غلظت  0.1 mg/mlاز IPTG به دست آمد. همچنین تفاوتی در بکارگیری TritonX100 یا NP40 به عنوان شوینده های حلال غشایی به دست نیامد. هر چند که بهترین غلظت برای شوینده 1% (حجمی/حجمی) مشخص شد.

شاخص‌های تعامل:   مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

بازدید 1170

مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resourcesدانلود 299 مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resourcesاستناد 0 مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resourcesمرجع 0
اطلاعات دوره: 
  • سال: 

    1387
  • دوره: 

    35
  • شماره: 

    6
  • صفحات: 

    75-88
تعامل: 
  • استنادات: 

    0
  • بازدید: 

    954
  • دانلود: 

    1291
چکیده: 

پراکسی زومها، اندامک های یوکاریوتی تک غشایی دارای عملکردهای متنوع بسته به بافت، مرحله رشد و شرایط محیطی می باشند. پروتئین های ماتریکس پراکسی زوم در سیتوپلاسم ساخته و توسط سیگنال هدف یابی پراکسی زومی (PTS) به درون این اندامک هدایت می شوند. یکی از پروتئین های ماتریکس پراکسی زوم، پروتئین پراکسی زومی (PEP) می باشد که عملکرد آن ناشناخته است. به منظور بررسی این ژن،PEP-cDNA  کلون شده در وکتور pEGFP-C1، وارد وکتور بیانی پروکاریوتی pGEX-6p-2 گردید تا در آینده بتوان PEP نشاندار شده با GST را جهت خالص سازی پروتئین و بررسی بیوشیمیایی بیشتر این پروتئین تولید نمود. ژن PEP همچنین در پایین دست ژن FLAG قرار گرفت و DNA نوترکیب FLAG-PEP در وکتور بیانی یوکاریوتی pUcD2SRaMCSHyg وارد گردید تا در آینده برای بیان گذرا و شناسایی جایگاه پروتئین PEP، از این پروتئین نشاندار استفاده شود. نتایج بدست آمده نشان دادند که قطعه PEP-DNA و FLAG-PEP به درستی و بدون هیچگونه موتاسیونی درون وکتورها قرار گرفته اند.

شاخص‌های تعامل:   مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

بازدید 954

مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resourcesدانلود 1291 مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resourcesاستناد 0 مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resourcesمرجع 0
اطلاعات دوره: 
  • سال: 

    1390
  • دوره: 

    9
  • شماره: 

    1
  • صفحات: 

    2267-2275
تعامل: 
  • استنادات: 

    0
  • بازدید: 

    1127
  • دانلود: 

    213
چکیده: 

پراکسی زوم ها یکی از اندامک های سلول های یوکاریوتی هستند که دارای وظایف گوناگونی می باشند. یکی از پروتئین های ماتریکس پراکسی زوم به نام پروتئین پراکسی زومی (PEP) نامیده می شود که در سال 2002 کلون گردید. PEP واجد 209 اسید آمینه است و به نظر می رسد که در تمایز بافت های جنین موش نقش دارد. از جمله خصوصیات این پروتئین، افزایش بیان طی میوژنز و تمایز مغز جنین موش می باشد. برای تحقیق برروی نحوه عملکرد این پروتئین بر مکانیسم نوروژنز نیاز بود که بتوان در مراحل مختلف نوروژنز، این ژن را خاموش یا روشن کرد و نتایج حاصل از تغییر در بیان آن را بررسی نمود. لذا در مطالعه حاضر PEP cDNA را در سیستم بیانی یوکاریوتی سامانه القایی Tet off وارد نمودیم تا بتوان در آینده آن را به رده سلولی بنیادی ترانسفکت نماییم و بیان بیش از حد آن را توسط داکسی سیکلین یا تتراسیکلین با تنظیم سطح آنتی بیوتیک در سلول های بنیادی موشی بررسی نماییم. برای این منظور نیاز بود که cDNA هدف تکثیر شود و سپس به داخل حامل الحاق گردد. بنابراین در طراحی پرایمر وجود دو محل برش آنزیم محدودالاثر در ابتدا و انتهای ژن همساز با حامل و همچنین توالی Kozak جهت بیان بیشتر پروتنین PEP درنظر گرفته شد و PEP cDNA تکثیر گردید. با تاثیر آنزیم های محدودالاثر در دو انتهای PEP cDNA نهایتا قطعه برش یافته به داخل حامل pTRE2pur از سیستم بیانی Tet off وارد شد. سیستم بیانی Tet off یک سیستم بیانی دوگانه می باشد، به این معنی که واجد یک وکتور به نام Tet off است که یک عنصر پروتئینی را تولید کرده که به واسطه آنتی بیوتیک تتراسیکلین یا داکسی سیکلین بیان ژن را در وکتور دوم به نام pTRE2pur، روشن و خاموش می کند. در این سیستم ابتدا باید وکتور Tet off را به سلول هدف ترانسفکت کرده و دودمان سلول پایدار ایجاد نمود و سپس وکتور دوم (pTRE2pur) که حامل ژن است را به این دودمان وارد نمود. برای اینکه به طور یقین پایدار بودن سلول به حامل Tet off را به اثبات برسانیم، علاوه بر ساخت ,TRE2pur/PEP cDNA EGFP را بداخل حامل TRE2pur وارد نموده و سازه TRE2pur/EGFP را تهیه نمودیم.

شاخص‌های تعامل:   مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

بازدید 1127

مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resourcesدانلود 213 مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resourcesاستناد 0 مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resourcesمرجع 0
مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources
اطلاعات دوره: 
  • سال: 

    0
  • دوره: 

    10
  • شماره: 

    4 (پیاپی 39)
  • صفحات: 

    2901-2905
تعامل: 
  • استنادات: 

    0
  • بازدید: 

    630
  • دانلود: 

    265
چکیده: 

ژن Fndc5 که با نام دیگر پروتئین پروکسیزومی (PEP) شناخته شده است کدکننده پروتئینی حاوی 209 اسید آمینه می باشد. این ژن به طور عمده در بافت های قلب، ماهیچه های اسکلتی و مغز بیان میشود. این مطالعه جهت روشن شدن الگوی بیان این ژن در هنگام تمایز سلول های بنیادی جنینی موشی به سلولهای قلبی صورت پذیرفت. بنابراین سلول های بنیادی جنینی موشی به عنوان مدل مناسب برای تمایز قلبی القا شده با آسکوربیک اسید به کار گرفته شدند و الگوی بیانی ژن PEP در مراحل مشخصی از تمایز توسط real-time PCR بررسی شد . نتایج نشان دهنده افزایش چشمگیر بیان ژن PEP در کاردیومیوسیت های بالغ بود. در نتیجه افزایش بیان ژن PEP احتمالا در مراحل انتهایی کاردیوژنز دارای نقش احتمالی میباشد که جهت مشخش شدن آن نیازمند مطالعات بیشتر میباشد.

شاخص‌های تعامل:   مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

بازدید 630

مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resourcesدانلود 265 مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resourcesاستناد 0 مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resourcesمرجع 0
نویسندگان: 

OSTADSHARIF M.

نشریه: 

Cell Journal (Yakhteh)

اطلاعات دوره: 
  • سال: 

    2011
  • دوره: 

    13
  • شماره: 

    SUPPLEMENT 3 (7TH CONGRESS ON STEM CELL BIOLOGY AND TECHNOLOGY)
  • صفحات: 

    40-41
تعامل: 
  • استنادات: 

    0
  • بازدید: 

    227
  • دانلود: 

    0
چکیده: 

Objective: Peroxisomal matrix protein is mainly expressed in heart, skeletal muscle, and brain tissues. To study the expression of peroxisomal protein (PEP) during neurogenesis, we here employed P19 cells as an in vitro model of neural differentiation.Materials and Methods: Expression pattern of PEP was investigated under distinct steps of differentiation by real time PCR. Time course study of the PEP expression revealed that expression increased prominently during aggregate formation in P19 cells. The expression level of endogenous genes such as MAP-2, PEP, catalase and PEX3 as peroxisomal markers, compared withβ-tubulin as housekeeping gene were monitored during different stages of neural differentiation.Results: The results were semi-quantified and revealed the highest relative expression of PEP in cell aggregates when treated by RA. In contrast, in the absence of RA, the relative expression of PEP was at the lowest level in aggregates and gradually increased in later stages. Unlike expression of PEP and MAP2 which are stage specific dependent, the expression levels of the other two peroxisomal markers, catalase and PEX3, were not stage dependent.Conclusion: The results of this study showed that elevated level of PEP expression was dependent on RA. A further insight in PEP gene expression, quantitative real time PCR results showed significant difference in PEP expression in presence and absence of RA.

شاخص‌های تعامل:   مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

بازدید 227

مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resourcesدانلود 0 مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resourcesاستناد 0 مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resourcesمرجع 0
نویسندگان: 

MARTINEZ FERRER M. | RUIZ LOZANOP P. | CHIEN K.

اطلاعات دوره: 
  • سال: 

    2002
  • دوره: 

    224
  • شماره: 

    2
  • صفحات: 

    154-167
تعامل: 
  • استنادات: 

    1
  • بازدید: 

    155
  • دانلود: 

    0
کلیدواژه: 
چکیده: 

شاخص‌های تعامل:   مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

بازدید 155

مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resourcesدانلود 0 مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resourcesاستناد 1 مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resourcesمرجع 0
نویسندگان: 

ARNESON N. | HUGHES S. | HOULSTON R.

نشریه: 

CSH PROTOCOLS

اطلاعات دوره: 
  • سال: 

    2008
  • دوره: 

    -
  • شماره: 

    -
  • صفحات: 

    0-0
تعامل: 
  • استنادات: 

    1
  • بازدید: 

    203
  • دانلود: 

    0
کلیدواژه: 
چکیده: 

شاخص‌های تعامل:   مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

بازدید 203

مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resourcesدانلود 0 مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resourcesاستناد 1 مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resourcesمرجع 0
litScript
telegram sharing button
whatsapp sharing button
linkedin sharing button
twitter sharing button
email sharing button
email sharing button
email sharing button
sharethis sharing button