مجله بیوتکنولوژی ایران
سال:1386 | دوره:5 | شماره:3 |تعداد مقالات:10

هدف این پژوهش شناسایی ژن های اسید فسفاتاز گیاه آرابیدوپسیس تالیانا قابل القا در شرایط تنش فسفات بوده است. گروه بندی این ژن ها با استفاده از همردیفی چندگانه توالی آمینواسیدی اسید فسفاتازهای موجودات یوکاریوت صورت گرفت. در نتیجه این همردیفی این پروتئین ها به چهار گروه تقسیم شدند که شامل اسید فسفاتازهای بنفش می شود. بر اساس توالی حفظ شده گروه اسید فسفاتازهای بنفش گیاهان، قارچ ها و جانوران آغازگرهای اختصاصی و غیر اختصاصی طراحی شد. بر اساس دو روش نمایش متفاوت، الگوی بیان ژن های اسید فسفاتاز بنفش در ریشه های این گیاه در شرایط تنش و بدون تنش مورد مقایسه قرار گرفت. با بررسی قطعات دارای نمایش متفاوت، 7 کلون cDNA جداسازی شد. بررسی لکه گذاری نوردرن بلات معکوس و واکنش RT-PCR نیمه کمی الگوی ابراز ژن های فوق را در شرایط محیطی مختلف مانند تنش فسفات، غلظت بالای نمک، تنش سرما، تنش سولفور و نیتروژن آشکار ساخت. با استفاده از داده های ارایه شده در این پژوهش برخی نقش های احتمالی این ژن ها در جذب و بازیابی فسفات را می توان پیشنهاد نمود.

در این مطالعه آندروژنز درون شیشه ای ذرت از طریق کشت بساک مورد مطالعه قرار گرفت. ترکیب دو محیط کشت القا جنین (IMSS, YPm)، وجود غلظت های مختلف کلشیسین در محیط پیش تیمار (100, 200, 250, 300, 400mgl-1, IM1) و مدت زمان پیش تیمار (0، 3، 6 و 9 روز) در دو ژنوتیپ (DH5×DH7, ETH-M82) آزمایش شده است. بعد از پیش تیمار کلشیسین، بساک ها به منظور القا ساختارهای جنین مانند (ELSs) به دو محیط کشت القا جنین منتقل شدند. سپس ELSs به منظور باززایی گیاه به محیط کشت YPNAS منتقل شدند. نتایج نشان داد که در ژنوتیپ DH5×DH7، کلشیسین با غلظت 100mgl-1 در محیط پیش تیمار به طور معنی داری تعداد ELSs را افزایش داده است (19.6) در حالی که شاد (بدون کلشیسین) و غلظت 400mgl-1 از کلشیسین کمترین تعداد از ELSs را تولید کردند (به ترتیب 5.8 و 5.7). در این ژنوتیپ پیش تیمار کلشیسین به مدت 3 روز بیشترین تعداد از ELSs را تولید کرد (16.83). همچنین محیط کشت القا YPm بیشترین تعداد از ELSs را تولید کرد (14.4). در ژنوتیپ ETH-M82 اثر متقابل 6 روز پیش تیمار با غلظت 300mgl-1 کلشیسین بیشترین تعداد ELSs را تولید کرد (25). در این ژنوتیپ افزایش معنی داری در تعداد ELSs با استفاده از محیط کشت القا YPm مشاهده شد (22.3). فراوانی دو برابر شدن خود به خودی کروموزوم ها در تیمار شاهد مربوط به هر دو ژنوتیپ پایین بود (%7)، اما این ژنوتیپ ها قادر بودند با استفاده از غلظت پایینی از کلشیسین در محیط کشت پیش تیمار (250 mgl-1) تعداد قابل توجهی گیاه دابلدهاپلوئید از ELSs تولید کنند (%63). غلظت های بالاتر کلشیسین (300, 400mgl-1) ناهنجاری های مورفولوژیکی و اختلالات کروموزومی بیشتری را ایجاد کردند.

ژنوتیپ های بسیاری از پسته در ایران وجود دارد که تنوع ژنتیکی آنها به طور کامل مشخص نشده است. اکثر مطالعات انجام شده در بررسی تنوع ژنتیکی پسته های ایران بر اساس صفات مورفولوژی یا آیزوزایمها می باشد. در این تحقیق تنوع ژنتیکی تعدادی از ارقام پسته همراه با بعضی از گونه های وحشی با استفاده از نشانگرهای AFLP مورد ارزیابی قرار گرفت. 13 ترکیب پرایمر برای ارزیابی 45 نمونه پسته استفاده شد. در مجموع 504 باند چند شکل با متوسط چند شکلی %95.2 حاصل شد. تجزیه خوشه ای نمونه ها را به چهار گروه متفاوت منتسب کرد. تمامی ارقام تجاری پسته در گروه 1 و 2 دسته بندی شده و گونه های وحشی جنس پسته از ارقام اهلی جدا شدند. نتایج تحقیق نشان داد که نشانگر AFLP می تواند به عنوان ابزار مفیدی برای بررسی تنوع ژنتیکی اراقم پسته مورد استفاده قرار گیرد.

برای ایجاد جهش در ژن ina در باکتری اروینیا هربیکلا از ترانسپوزون Tn5 که در پلاسمید psup2021 کلون شده بود استفاده شد. این پلاسمید به آنتی بیوتیک کانامایسین مقاوم بود. انتقال پلاسمید به سلولهای باکتری به کمک الکتروپوریشن در ولتاژ 1800v و فاصله بین دو الکترود یک میلی متر انجام شد. جهت ردیابی ژن ina در ایزوله های اروینیا هربیکلا از واکنش زنجیره ای پلیمراز با یک جفت آغازگر اختصاصی مربوط به ژن inaZ استفاده شد. جهت بررسی فعالیت هسته یخ، آزمون انجماد قطره ای مورد استفاده قرار گرفت. برای بررسی بیشتر جهش یافته ها و تاثیر آنها روی گیاه، سوسپانسیونی از هر کدام از جهش یافته ها در غلظت 107-108 سلول در میلی لیتر تهیه و روی گیاهچه های دو برگی آفتاب گردان پاشیده شد. گیاهچه ها به مدت 8 تا 10 ساعت در دمای -8°C تا C°-10 نگهداری شدند. در مجموع تعداد 3 جهش یافته به دست آمد که در گیاهچه ها ایجاد یخ زدگی نکردند. این سه جهش یافته فاقد قابلیت یخ زایی در آزمون انجماد قطره ای بودند.

در این تحقیق 125 راس گاو رد پاید روسی برای ژن پرولاکتین تعیین ژنوتیپ شدند. تجزیه ژنوتیپ های PRL Rsa-I با روش واکنش زنجیره ای پلی مراز (PCR-RFLP) انجام گردید. در این نژاد فراوانی های آللی بترتیب B=0.206, A=0.794 بدست آمد، همچنین فراوانی های ژنوتیپی BB, AB, AA بترتیب عبارت بودند از 0.598، 0.392 و 0.01. نتایج مطالعه نشان داد که که ژنوتیپ BB تولید شیر بیشتری نسبت به حیوانات AA و AB دارد (P<0.05). چربی شیرگاوهای دارای ژنوتیپ BB بیشتر از حیوانات AA و AB بود (P<0.05). در مورد درصد چربی شیر و درصد پروتئین شیر بین سه ژنوتیپ تفاوتی مشاهده نگردید. این نتایج نشان می دهد که مقدار شیر و مقدار چربی تولید استحصال شده از گاوهای دارای ژنوتیپ BB بالاترین مقدار است. با توجه به نتایج ارایه شده، می توان ژن پرولاکتین را بعنوان یک مارکر برای صفات شیردهی در گاو در نظر گرفت.

فاکتور محرکه کلنی گرانولوسیت انسانی (hG-CSF) در مخمر متیلوتروف پیکیا پاستوریس تحت کنترل پروموتور AOX1 بیان شد. بدین منظور با قرار دادن ژن hG-CSF در پلاسمید pPIC9 یک پلاسمید ساخته شد. پس از الحاق پلاسمید خطی شده به ژنوم سویه مخمر GS115، سویه های با فنوتیپ مصرف کننده سریع متانول (Mut+) تولید بهتری نشان دادند. تاثیر فاکتورهای محیطی از قبیل دما و pH روی رشد مخمر پیکیا پاستوریس و تولید hG-CSF نوترکیب در کشت با فرمانتور مورد ارزیابی قرار گرفت. دمای 28 درجه سانتی گراد و pH برابر 6 به عنوان شرایط بهینه رشد و تولید پروتئین معرفی شد. به منظور افزایش بازده رشد مخمر و تولید ترشحی hG-CSF نوترکیب، یک فرایند تخمیر غیر مداوم همراه با خوراک دهی توسعه یافت. در نهایت، با استفاده از کشت با دانسیته سلولی بالای مخمر، مقادیر وزن خشک سلولی و پروتئین hG-CSF نوترکیب به ترتیب به 100 گرم بر لیتر و 35 میلی گرم بر لیتر رسید.

در این تحقیق، مطالعه بر روی خصوصیات سفید کردن خمیر و کاغذ حاصل از پخت باگاس (تفاله نیشکر) به روش کرافت، در شرایط عملیاتی مختلف (دما، زمان، pH، میزان آنزیم و غلظت خمیر) با استفاده از آنزیم تجاری و هیدروژن پراکسید مورد بررسی قرار گرفته است. کیفیت خمیر و کاغذ تولید شده از باگاس با استفاده از متغیرهای وابسته نظیر عدد کاپا، راندمان اولیه، راندمان نهایی، میزان سفید شدن، طول پارگی، اندیس مقاومت به ترکیدن و اندیس مقاومت به پارگی مورد محاسبه و بررسی قرار گرفت. در روش آماری مورد استفاده در این تحقیق که با بکاربردن نرم افزار MINITA انجام شد، نیاز به 43 پارامتر است که از رابطه N=2K+2K+1 (K مشخصه تعداد متغیرهای مستقل است) بهره گرفته شده است. معادله حاصل از این روش آماری به محقق در تعیین میزان بهینه محصول در شرایط عملیاتی مناسب کمک خواهد کرد. بر اساس نتایج بدست آمده، شرایط بهینه عملیات سفید کردن کاغذ با این آنزیم در دمای 35°C زمان 2 ساعت، pH=5، غلظت خمیر %12 و آنزیم برابر با 6IU/g می باشد.