سلول و بافت
سال:1395 | دوره:7 | شماره:4 |تعداد مقالات:12

هدف: گیاه دارویی شقایق (Papaver somniferum L.) تنها منبع تجاری از آلکالوئیدهای دارویی بنزوفنانترین از زیر گروه آلکالوئیدهای بنزیل ایزوکوئینولین است که شامل مسکن های ضد درد مانند کدئین و داروهای نیمه مصنوعی اکسی کدون، باپرنورفین و نالتروکسون می باشد. اگرچه بیشتر ژن های مسیر این آلکالوئیدها شناسایی شده اند، ولی تنظیم پس از نسخه برداری ژن های مسیر آلکالوئیدهای آن ها به خوبی شناسایی نشده است. خاموش سازی القایی با ویروس (virus induced gene slencing) یکی از روش های سریع برای خاموشی ژن است که در این تحقیق از این روش برای بررسی خاموشی یکی از ژن های مهم مسیر آلکالوئیدهای این گیاه استفاده شد.مواد و روش ها: در این تحقیق به منظور کاهش سیستماتیک در سطوح بیان ژن آنزیم های مسیر تولید آلکالوئیدهای بنزیل ایزوکوئینولین از VIGS استفاده شد. جهت خاموشی ژن کدئین رداکتاز (Codeinone Reductase) از ناقل pTRV جهت همسانه سازی استفاده شد. انتقال آگروباکتری حاوی سازه مورد نظر به برگ های 2تا 3 هفته ای با استفاده از روش اگرواینفیلتراسیون انجام شد.نتایج: نتایج همسانه سازی این ژن با استفاده از روش های مختلف مولکولی همانند PCR و هضم آنزیمی مورد تایید قرار گرفت. ترا ریختگی گیاهان تلقیح شده با سازه ژنتیکی مورد نظر با استفاده از PCR اثبات شد. تعیین سطوح نسخه برداری ژن هدف با استفاده از فن PCR نیمه کمی و PCR در زمان واقعی نشان داد که بیان ژن COR حدود 89 درصد کاهش یافته است.نتیجه گیری: نتایج این تحقیق نشان داد که با استفاده از روش تداخل RNA، بیان ژن کدئین رداکتاز به صورت معنی داری در مقایسه با شاهد کاهش بیان داشت.

گیاهان دارویی از هزاران سال پیش به عنوان یکی از مهم ترین منابع درمان بیماری های مختلف کاربرد داشته اند. این گیاهان، گروه بزرگ و متنوعی از ترکیبات آلی به نام متابولیت های ثانویه را تولید می کنند. متابولیت های ثانویه ترکیباتی هستند که از متابولیت های اولیه (متابولیت های مربوط به تغذیه و بقا) که برای حفظ حیات گیاه ضروری هستند تولید می شوند. دست ورزی محیط های کشت سلول گیاهی با استفاده از الیسیتورهای غیرزیستی یکی از راه کارهای مهم جهت القای تولید متابولیسم های ثانویه و افزایش عملکرد این ترکیبات ارزشمند می باشد، زیرا پتانسیل تولید این مواد در شرایط طبیعی بسیار محدود است. الیسیتورها از طریق فعال کردن مکانسیم های دفاعی باعث القای تشکیل متابولیت های ثانویه و پاسخ های دفاعی سریع در سلول گیاهی نظیر افزایش جریانات یونی از عرض غشای پلاسمایی، تولید گونه های اکسیژن واکنشگر، فعال سازی ژن های مربوط به دفاع، تغییرات ساختاری در دیواره سلولی و سنتز فیتوالکسین ها می شوند. در این نوشتار جنبه های مختلف امکان تولید متابولیت های ثانویه در کشت سلول گیاهی با استفاده از الیسیتورهای غیرزیستی مرور گردیده است. تازه های تحقیق –

هدف: در این مطالعه قابلیت عصاره مغز نوزاد رت برای القای تمایز عصبی در سلول های بنیادی کارسینومای جنینی P19 مورد بررسی قرار گرفت.مواد و روش ها:عصاره مغز نوزاد رت تحت شرایط استریل جمع آوری و غلظت پروتئین کل موجود در آن تعیین شد. سپس میزان زنده مانی سلول ها پس از تیمار با عصاره مغز به دست آمد. جهت تمایز، اجسام شبه جنینی حاصل از کشت معلق سلول ها به مدت هفت تا چهارده روز در معرض محیط کشت حاوی سه درصد سرم به همراه عصاره قرار گرفتند. برای ارزیابی تمایز عصبی از دو روش رنگ آمیزی اختصاصی و real-time PCR استفاده شد.نتایج: رنگ آمیزی کرزیل ویوله مورفولوژی عصبی سلول های تمایز یافته را محرز ساخت. بیان ژن های اختصاصی عصبی به وسیله real-time PCR تایید شد. عصاره مغز در حال تکوین که سرشار از عوامل نوروتروفیک است، توانست بیان ژن های سیناپتوفیزین (پروتئین غشای پیش سیناپسی) و نستین (فیلامنت حدواسط سلول های پیش ساز عصبی) را در این سلول ها القا نماید. همچنین بیان فاکتور رونویسی Nanog که از عوامل بسیار مهم در تنظیم میزان پرتوانی سلول های بنیادی و مرتبط با خودنوزایی این سلول هاست، تحت تاثیر عامل القایی عصاره مغز کاهش یافت.نتیجه گیری: نتایج این پژوهش نشان داد که عصاره مغز نوزاد رت می تواند باعث بروز فنوتیپ عصبی در سلول های بنیادی P19 شده و بیان ژن های اختصاصی عصبی را در این سلول ها القا نماید.این مطالعه پتانسیل استفاده از ترکیب عصاره مغز نوزاد رت و درمان با سلول بنیادی را برای بهبود نقایص بیماری های تخریب کننده عصبی پیشنهاد می کند.

هدف: هدف از این پژوهش بررسی اثر دو نانو ذره به عنوان الیسیتور بر بیان سه ژن کلیدی این مسیر بود.مواد و روش ها:. به این منظور از غلظت های 0.5، 0.75 و 1 میلی گرم در لیتر نانو اکسیدکبالت و نانواکسید روی استفاده و در زمان های 8، 24و 48 ساعت پس از تیمار، نمونه برداری انجام شد.نتایج: بررسی بیان ژن ها به روش SQ-RT-PCR انجام شد. به طورکلی، هر دو الیسیتور مورد استفاده بر بیان ژن ها تاثیر داشتند. تاثیر نانواکسید روی بر بیان ژن ها بیشتر از نانواکسید کبالت بود. در مورد ژن STR و D4H بیشترین افزایش بیان مربوط به غلظت 0.5 میلی گرم در لیتر و برای ژن DAT غلظت 1 میلی گرم در لیتر نانواکسید روی در بازه زمانی 8 ساعت بود. نانواکسید کبالت در اکثر غلظت ها و بازه های زمانی مورد استفاده باعث کاهش بیان ژن های مورد بررسی شد.نتیجه گیری: هر دو نانو ذره نانو اکسید کبالت و روی توانستند بر بیان ژنهای کلیدی مسیر وین بلاستین و وین کریستین تاثیر بگذارند.

هدف: هدف از پژوهش حاضر تعیین کمی برخی از آنتوسیانین های عصاره پوست لوبیا قرمز تیمار شده با میدان الکترومغناطیسی و همچنین بررسی فعالیت ضدتکثیری عصاره های تهیه شده می باشد.مواد و روش ها: در این تحقیق، گروه 1 و 2 (به ترتیب بذرهای خشک و مرطوب) به مدت 45 دقیقه و گروه 3 و4 (به ترتیب بذرهای خشک و مرطوب) دو بار، هر بار 45 دقیقه و با فاصله زمانی 120 دقیقه تحت تاثیر میدان الکترومغناطیسی قرار گرفتند. سپس بذرها کشت شدند. پوست بذرهای برداشت شده هر گروه جدا شد و با حلال متانولی عصاره گیری شد. در عصاره ها دو گروه آنتوسیانین شامل سیانیدین و پلارگونیدین، توسط دستگاه HPLC (کروماتوگرافی) شناسایی و اندازه گیری شد. همچنین بررسی فعالیت ضدتکثیری به روش MTT بر روی لاین سلول های سرطان تخمدان (A 2780 CP) صورت گرفت.نتایج: در بین عصاره های مطالعه شده، به ترتیب گروه 1 دارای محتوای بیشتری سیانیدین و گروه 4دارای محتوای بیشتری پلارگونیدین می باشد. نتایج حاصل از بررسی فعالیت ضدتکثیری نشان داد که عصاره های متانولی پوست لوبیاهای قرمز تیمار شده با شدت 4 میلی تسلا، دارای فعالیت ضدتکثیری سلولی بالایی بر روی سلول های سرطان تخمدان هستند (78.74 تا 84.44 درصد). همچنین در بین نمونه های تیمار شده، گروه 2 با IC50: 72.63±2.2 فعالیت ضدتکثیری سلولی بالاتری را نشان داد.نتیجه گیری: تیمار میدان الکترومغناطیسی در افزایش مقادیر آنتوسیانین های لوبیا قرمز موثر می باشد و عصاره پوست لوبیا قرمز می تواند به عنوان یک منبع طبیعی برای مکمل های غذایی و دارویی با خاصیت ضدتکثیری به شمار آید.

هدف: با توجه به اینکه ایران در دنیا یک منطقه خشک و نیمه خشک به شمار می آید و همچنین یکی از کشورهای اصلی تولیدکننده خیار محسوب می شود بررسی اثرات خشکی بر این گیاه و تغییرات سیستم آنتی اکسیدانتی از اهمیت خاصی برخوردار است.مواد و روش ها: در این پژوهش خیار رقم اصفهانی در شرایط گلخانه ای کشت داده شد و در مرحله 3 تا 5برگی از رشد گیاه به منظور بررسی تغییرات پروتئینی و سیستم آنتی اکسیدانتی به مدت21 روز در معرض چهار سطح از تنش خشکی (100، 75، 50 و 25 درصد ظرفیت زراعی) قرارگرفت و پاسخ های گیاه بررسی شد. میزان نشت الکترولیت، پراکسیداسیون لیپید، پروتئین، پرولین، آنتی اکسیدانت کل، کاتالاز و گایاکول پراکسیداز، α توکوفرول و پراکسیدهیدروژن اندازه گیری شد.نتایج: بررسی نتایج این مطالعه نشان داد که میزان نشت الکترولیت، پراکسیداسیون لیپید، پرولین، آنتی اکسیدانت کل، کاتالاز، گایاکول پراکسیداز، α توکوفرول و پراکسیدهیدروژن تحت تنش خشکی در مقایسه با نمونه شاهد افزایش یافت و تنها شاخص میزان پروتئین تحت تنش خشکی در مقایسه با نمونه شاهد کاهش یافت.نتیجه گیری: نتایج این تحقیق نشان داد که احتمالا تحمل به خشکی رقم خیار مورد نظر با توجه به فعالیت های سیستم آنتی اکسیدانتی آنزیمی و غیرآنزیمی و همچنین تجمع پرولین صورت می گیرد.

هدف: هدف از این مطالعه بررسی تاثیر تیمار های مختلفی از تنظیم کننده های رشد بر میزان شاخه زایی، ریشه زایی، تولید کالوس و باززایی گیاه دارویی پونه سای بی کرک در شرایط درون شیشه ای بود.مواد و روش ها: بذرهای این گیاه در محیط کشت MS (موراشیگ و اسکوگ) نیم غلظت کشت و سپس گیاهچه ها واکشت شدند. پس از آن نمونه ها در سطوح مختلف تنظیم کننده های رشد BA و Kinetin، به صورت منفرد یا در ترکیب با IBA کشت شدند. برگ های همسان جهت کالوس زایی با تیمارهای تنظیم کننده های رشد BA و NAA در دو محیط (روشن و تاریک) استفاده شدند. همچنین جهت باززایی، کالوس های یکسان با تیمارهای تنظیم کننده های رشد BA و NAA به کاربرده شدند.نتایج: نتایج حاصل از این تحقیق نشان داد که در بخش پرآوری بیشترین وزن تر (2315.91 میلی گرم) و تعداد شاخه (15.22 در هر بوته) در هر گیاهچه در تیمار 1 میلی گرم در لیتر BA و 0.25 میلی گرم در لیتر IBA حاصل شد. همچنین تیمار BA با غلظت 2 میلی گرم در لیتر موجب تولید طویل ترین شاخه (5.50 سانتی متر) و بیشترین تعداد گره (6.53 در هر گیاهچه) گردید. بیشترین طول، تعداد و درصد ریشه در محیط کشت MS با 1.2 غلظت نمک و IBA 0.5 میلی گرم در لیتر حاصل شد. در بخش کالوس زایی، بیشترین وزن تر کالوس مربوط به کاربرد 1 میلی گرم در لیتر BA و 0.5 میلی گرم در لیتر NAA بود. علاوه بر این، بیشترین درصد کالوس زایی در محیط تاریک مشاهده شد و بین تیمار های هورمونی به کاربرده شده تفاوت معنی داری دیده نشد. همچنین، بیشترین درصد باززایی از کالوس مربوط به دو تیمار تنظیم کننده رشد 1BA میلی گرم در لیتر با 0.2 میلی گرم در لیتر NAA (83.2 درصد) و BA 1 میلی گرم در لیتر با 0.5 میلی گرم در لیتر NAA (81.66 درصد)، بدون هیچ تفاوت معنی داری بود. نتیجه گیری: در مجموع مفیدترین ترکیب تنظیم کننده رشد برای ریزازدیادی گیاه در معرض خطر انقراض پونه سای بی کرک تیمار 1 میلی گرم در لیتر BA با 0.5 میلی گرم در لیتر IBA و NAA بود.

هدف: در قرن حاضر، تولید داروهای نوترکیب افزایش یافته است. از جمله این داروها، هورمون رشد می باشد که به علت مشکلاتی که در پروسه بیان نوع سیتوپلاسمی و پری پلاسمی این پروتئین وجود دارد، یافتن راه حلی که بتواند بیان را بهینه نماید ضروری به نظر می رسد. لذا در این تحقیق با استفاده نمودن از trx-tag بیان هورمون رشد را به صورت محلول بهینه شد که علاوه بر افزایش بیان پرتئین (حل مشکل پری پلاسمی) از تشکیل انکلوزیون بادی (مشکل سیتوپلاسمی) جلوگیری می نماید.مواد و روش ها: سنتز ژن و کاست ژنی به منظور بیان هورمون رشد در سیستم بیانی pET 32a صورت گرفت. کاست ژنی شامل trx-tag برای محلول سازی پروتئین، His tag به منظور خالص سازی و انتروکیناز در ابتدای ژن rHgh به منظور جداسازی برچسب های قبلی از این پروتئین می باشد.نتایج: بعد از کلون سازی این ژن در وکتور و بیان آن، تایید آن توسط وسترن بلات صورت گرفت. نتایج به دست آمده با استفاده از نرم افزارهای آنالیز ژل درصد بیانی حدود از کل بیان را در سویه نوترکیب نشان می دهد.نتیجه گیری: در این تحقیق، نشان داده شد که با استفاده از Trx-tag می توان پروتئین را به حالت محلول در آورد و میزان بیان را بالا برد در ادامه با انجام مراحل تخمیر و پایین دستی می توان به نتایج بهتری دست یافت.

هدف:. هدف مطالعه حاضر ارزیابی اثرات ژل رویال و ویتامین C در برابر آسیب کلیوی ناشی از فنیل هیدرازین در موش بود.مواد و روش ها: موش های نر بالغ به صورت تصادفی به هشت گروه هشت تایی تقسیم شدند. چهار گروه از موش ها فنیل هیدرازین را به میزان 60 میلی گرم به ازای هر کیلوگرم وزن بدن به صورت داخل صفاقی هر 48 ساعت به مدت 35 روز دریافت نمودند. به سه گروه از گروه های فوق چهار ساعت قبل از تزریق فنیل هیدرازین به ترتیب ویتامین C به میزان 250 میلی گرم بر کیلوگرم به صورت داخل صفاقی، ژل رویال به میزان 100 میلی گرم بر کیلوگرم به صورت خوراکی و نیز ژل رویال و ویتامین C به صورت هم زمان با دزهای مشابه تجویز شد. گروه شاهد دریافت کننده حلال و گروه هایی که تنها ویتامین C، ژل رویال و ویتامین C و ژل رویال را به صورت هم زمان دریافت می نمودند، نیز در نظر گرفته شد. 24 ساعت پس از آخرین تیمار، نمونه های سرم و بافت کلیه جمع آوری شدند و به ترتیب جهت ارزیابی های بیوشیمیایی و بافت شناسی مورد استفاده قرار گرفتند. داده های این مطالعه با استفاده از آزمون آماری آنالیز واریانس یک طرفه و تست تعقیبی دانکن مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت.نتایج: فنیل هیدرازین به شکل معنی داری موجب افزایش سطح سرمی مالون دی آلدئید و نیز کاهش ظرفیت آنتی اکسیدانت تام سرم شد (p<0.05). به علاوه، فنیل هیدرازین افزایش معنی داری (p<0.05) در قطر حفره میانی لوله های پیچیده نزدیک و نیز کاهش معنی داری (p<0.05) در ارتفاع سلول های پوششی این لوله ها ایجاد کرد. تجویز هم زمان ویتامین C و ژل رویال به طور قابل توجه ای تغییرات مشاهده شده در نتایج مذکور را بهبود بخشید.نتیجه گیری: به نظر می رسد ژل رویال و ویتامین C به واسطه مهار واکنش های اکسیداتیو می تواند آسیب کلیوی ناشی از فنیل هیدرازین در موش را کاهش دهند.

هدف: این مطالعه با این هدف انجام شد تا مشخص شود که آیا سیلیمارین قادر است اثرات مخرب سدیم ارسنیت را بر روی تمامیت DNA و هسته اسپرم قوچ محافظت کند.مواد و روش ها: اسپرم های گرفته شده از اپی دیدیم قوچ فراهانی (Ovis aries)، پس از Swim up به پنج گروه تقسیم شدند: 1- اسپرم های لحظه صفر، 2- اسپرم های لحظه 180 دقیقه (کنترل)، 3- اسپرم های تیمار شده با سدیم آرسنیت (10 mM) به مدت 180 دقیقه، 4- اسپرم های تیمار توام سیلیمارین (20 mM) + سدیم آرسنیت (10 mM) به مدت 180 دقیقه و 5- اسپرم های تیمار شده با سیلیمارین (20 mM) به مدت 180 دقیقه. تمامیت DNA اسپرم قوچ با استفاده از تست (Sperm Chromatin Dispersion (SCD، به منظور بررسی شکستگی DNA و رنگ آمیزی آکریدین اورنژ، جهت بررسی دناتوره شدن ساختمان دو رشته ای DNA مورد ارزیابی قرار گرفت. به منظور بررسی تمامیت هسته اسپرم، پس از رنگ آمیزی با دیف-کوئیک، قطر هسته اسپرم اندازه گیری شد.نتایج: در گروه تیمار شده با سدیم آرسنیت، درصد شکستگی DNA نسبت به گروه کنترل به طور معنی داری افزایش و قطر هسته به طور معنی داری کاهش یافت. در حالی که این آلاینده زیست محیطی تاثیری بر دناتوره شدن ساختمان دو رشته ای DNA اسپرم نداشت. کاربرد مشترک سیلیمارین+ سدیم آرسنیت توانست شکستگی DNA و کاهش قطر هسته را نسبت به گروه تیمار شده با سدیم آرسنیت به طور معنی داری جبران کند.نتیجه گیری: سیلیمارین به عنوان یک آنتی اکسیدانت قوی قادر است اثرات مخرب سدیم آرسنیت را بر شکستگی DNA و قطر هسته اسپرم قوچ جبران نماید.