تثبیت نیتروژن مولکولی توسط باکتری های ریزوبیومی، منبع اصلی برای ورود پایدار نیتروژن مورد نیاز گیاهان به سیستم های کشاورزی است. تثبیت زیستی مولکول نیتروژن در کشاورزی می تواند به وسیله مایه زنی گیاهان لگوم با باکتری های ریزوبیومی دارای توانایی بالا در تثبیت این مولکول بهبود پیدا کند. آگاهی از تنوع زیستی جمعیت های بومی این باکتری ها برای طراحی تدابیر مایه زنی موفق می تواند مفید واقع شود. در این تحقیق تنوع زیستی، توانایی گره زایی و کارایی تثبیت نیتروژن 48 باکتری ریزوبیوم جداسازی شده از گر ه های گیاه یونجه کشت شده در مناطق مختلف استان همدان مورد مطالعه قرار گرفت. نتایج بررسی تنوع ژنتیکی سویه های مورد مطالعه با استفاده از تکنیک ITS-PCR-RFLP نشان داد که باکتری های مورد بررسی دارای تنوع ژنتیکی قابل توجه بوده و در سطح شباهت 70 درصد به 4 گروه III،II،I و IV تقسیم بندی شدند. نتایج آزمون گره زایی نشان داد که اکثر سویه ها دارای توانایی ایجاد گره در گیاه یونجه بودند، در حالیکه در اثر تلقیح این گیاه با سویه های KH16، KH24، KH10، KH6، KH133 و KH193 گره ای حاصل نشد. بر اساس نتایج حاصل از آزمون بررسی کارایی تثبیت نیتروژن سویه های مورد مطالعه، این باکتری ها به چهار دسته غیر موثر، نسبتا موثر، موثر و خیلی موثر تقسیم بندی شدند.