پژوهش های آسیب شناسی زیستی
سال:1399 | دوره:23 | شماره:2 |تعداد مقالات:7

اهداف: مهارکننده های متعددی برای مهار ویروس HIV-1 معرفی شده اند ولی به علت وجود نمونه های مقاوم به درمان اکثر این تلاش ها بی نتیجه مانده است. هدف از مطالعه حاضر نیز بررسی موتاسیون های مقاومت به درمان در ژن اینتگراز ویروس ایدز و تاثیر این موتاسیون ها بر ساختار، عملکرد و ویژگی های فیزیکی و شیمیایی این آنزیم با استفاده از نرم افزارهای بیوانفورماتیکی بود. مواد و روش ها: 36 توالی مربوط به ژن اینتگراز ویروس HIV-1 در بیماران ایرانی، از بانک ژنی NCBI دریافت شد و پس از تعیین موتاسیون ها در مقایسه با توالی مرجع، تغییرات پس ترجمه ای و خواص فیزیکی و شیمیایی آن مشخص شد. ساب تایپ توالی ها و همچنین ساختار دوم و سوم و برهم کنش های ممکن این آنزیم با مهارکننده های اصلی اینتگراز بررسی شد. یافته ها: بررسی توالی های انتخاب شده نشان دهنده موتاسیون های متعددی در این پروتئین بود. ساب تایپ غالب نمونه های مورد بررسی A1 بود و نتایج برهم کنش ها نشان داد موتاسیون های موجود در نمونه ها هیچ گونه تاثیر معنی داری بر برهم کنش مهارکننده ها با آنزیم اینتگراز ندارند. نتیجه گیری: دمین کاتالیتیک آنزیم اینتگراز محل اتصال اغلب مهارکننده های این آنزیم است که اغلب موتاسیون ها در ناحیه ای خارج از این دمین قرار گرفته اند و این موضوع می تواند دلیل اصلی عدم تاثیر این موتاسیون ها بر برهم کنش مهارکننده ها و آنزیم اینتگراز باشد. به صورت کلی یافته های این مطالعه نشان می دهد که مهارکننده های اینتگراز می توانند به عنوان روش موثری به منظور مهار این بیماری برای بیماران ایرانی استفاده شوند.

اهداف: توسعه عوامل ضدویروسی جدید رویکردی مناسب برای ریشه کن شدن عفونت هپاتیت C است. به دلیل عدم وجود مدل های حیوانی مناسب همواره سدی برای ارزیابی مناسب ترکیبات ضدویروسی در محیط زنده وجود دارد. توجه روزافزون به microRNAها نقطه قوت جدیدی در درمان های ضدویروسی محسوب می شود. هدف از مطالعه حاضر، استفاده از سنجش لوسیفراز برای تایید میان کنش بین miRNA و RNA ژنومی ویروس هپاتیت C (HCV) ژنوتیپ 1b به منظور سرکوب تکثیر این ویروس است. مواد و روش ها: قطعات ژنومی NS5B از ژنوم ویروس هپاتیت C به عنوان ناحیه MRE درون وکتور psiCHECK-2-TM ساب کلون شد. بیان نسبی وکتورهای لنتی ویروس بیان کننده miRNA در سلول Huh7. 5 از طریق میکروسکوپ فلورسانس و real-time PCR ارزیابی شد. لنتی ویروس بیان کننده let-7b به سلول های Huh7. 5 ترانسداکت شد. NS5B-psiCHECK-2-TM (MRE) به سلول Huh7. 5 مورد نظر ترانسفکت شد. به کمک کیت سنجش دوگانه لوسیفراز بیان نسبی لوسیفراز اندازه گیری شد. یافته ها: با استفاده از لنتی ویروس های بیان کننده let-7b شرایط بیان بالا و دایمی از let-7b در سلول مورد نظر ایجاد شد. از سوی دیگر اتصال اختصاصی توالی پاسخ دهنده (NS5B) به میکروRNA let-7b با کاهش نور لوسیفراز نشان داده شد. نتیجه گیری: برای حفظ بیان بالا و پایدار میکروRNAها در سلول از وکتورهای لنتی ویروس استفاده می شود. استفاده از سنجش لوسیفراز یکی از مناسب ترین روش های تایید میان کنش بین miRNA-mRNA است که می تواند برای ژن های ویروسی دیگر با میکروRNAهای متفاوت استفاده شود.

سیستم سازگاری نسجی انسان از نظر ژنتیکی و بروز بیوشیمیایی پیچیدگی های منحصربه فردی دارد که تعیین نوع آن را از منظر بالینی و آزمایشگاهی بسیار حائز اهمیت می کند. مهم ترین و شناخته شده ترین وظایف این سیستم مربوط به نقش حیاتی آن در پیوند اعضا است و علاوه بر آن نقش مهمی را در ارزیابی ریسک ابتلا به بیماری ها دارد. دقت و صحت دو مولفه حیاتی در تعیین آزمایشگاهی هاپلوتیپ های HLA در بیماران نیازمند پیوند است، به طوری که هر گونه تاخیر و خطا در این کار می تواند حیات بیمار را به خطر اندازد. نیاز به تعیین دقیق نوع HLA در کنار بهبود سرعت عمل و کاهش هزینه های انجام این ارزیابی سبب شده است تا روش های متعددی برای انجام این آزمایش معرفی شود. امروزه با معرفی نسل جدید تعیین توالی انقلابی در ارزیابی های ژنتیکی صورت گرفته است. تعیین هاپلوتیپ های HLA نیز از این تکنیک بهره مند است، به طوری که امروزه روش های متنوعی برای بررسی ژنتیکی HLA به کمک نسل جدید تعیین توالی معرفی شده اند. در مطالعه حاضر در کنار مرور روش های پیشین در تشخیص HLA، دو مورد از پرکاربردترین تکنیک ها براساس نسل جدید تعیین توالی تحت عنوان روش تعیین توالی حرارتی و روش ایلومینا Miseq مورد ارزیابی و مقایسه قرار گرفتند. . .

اهداف: افراد سیگاری در معرض مقادیر قابل توجهی از عوامل اکسیدان هستند. از طرفی نشان داده شده است ورزش باعث افزایش فعالیت آنزیم های آنتی اکسیدانی و کاهش رادیکال آزاد بدن می شود. بنابراین، هدف مطالعه حاضر بررسی اثر 12 هفته تمرین همزمان بر ظرفیت استرس اکسیداتیو و آنتی اکسیدان ها در فوتبالیست های سیگاری است. مواد و روش ها: 22 فوتبالیست سیگاری با وزن طبیعی و میانگین سنی 1/9± 23/9سال به طور تصادفی در دو گروه تجربی و کنترل قرار گرفتند. گروه تجربی، تمرینات همزمان شامل فعالیت هوازی و مقاومتی را 3 جلسه در هفته به مدت 12 هفته انجام دادند. شاخص های آنتی اکسیدانی (کاتالاز و سوپراکسیددیسموتاز) و شاخص پراکسیداسیون لیپیدی (مالون دی آلدهید)، 48 ساعت پیش و پس از پروتکل تمرینی در شرایط ناشتا (حداقل 8 ساعت) اندازه گیری شدند. برای بررسی تفاوت های درون گروهی داده ها، از آزمون تی همبسته و برای تفاوت های بین گروهی از آزمون تی مستقل با سطح معنی داری0/05p≤ استفاده شد. یافته ها: 12 هفته تمرین همزمان (هوازی و مقاومتی) سبب افزایش معنی دار آنزیم های کاتالاز و سوپراکسیددیسموتاز به عنوان آنتی اکسیدانت و کاهش معنی دار مالون دی آلدهید به عنوان شاخص استرس اکسیداتیو بازیکنان فوتبال سیگاری شد (0/05p≤ ). نتیجه گیری: تمرینات ورزشی همزمان (هوازی و مقاومتی) احتمالاً از طریق افزایش ظرفیت آنزیم های آنتی اکسیدانی و کاهش پراکسیداسیون لیپیدی سبب کاهش میزان استرس اکسیداتیو می شود.

اهداف: در فرآیند انجماد شیشه ای، کلسیم داخل سلولی تحت تاثیر مواد محافظ انجماد افزایش و توانایی تکوین تخمک کاهش می یابد. مطالعه حاضر با هدف کاهش کلسیم محیط پایه انجماد به منظور بهبود میزان لقاح و توانایی تکوین تخمک انجام شد. مواد و روش ها: مجموعه تخمک و سلول های کومولوسی از تخمدان گوسفند جمع آوری و پس از 24 ساعت کشت در محیط بلوغ، تخمک های متافاز II به پنج گروه شامل یک گروه کنترل (غیرانجمادی) و چهار گروه انجمادی تقسیم شدند. گروه های انجمادی براساس حضور یا عدم حضور اتیلن گلیکول تترااستیک اسید (EGTA) و کلسیم در محیط پایه طراحی شدند. به این منظور از چهار نوع محیط پایه شامل فسفات بافرسالین با و بدون کلسیم، همچنین فسفات بافرسالین دارای EGTA، با و بدون کلسیم استفاده شد. پس از ذوب، میزان لقاح و تکوین جنین تا تشکیل بلاستوسیست اندازه گیری شد. کیفیت بلاستوسیست با استفاده از رنگ آمیزی افتراقی و تجزیه و تحلیل آماری داده ها با استفاده از آنالیز واریانس یک طرفه انجام شد. یافته ها: بین گروه های انجمادی از لحاظ میزان زنده مانی تفاوت معنی داری وجود نداشت. میزان لقاح در محیط فاقد کلسیم بالاتر از سایر گروه های انجمادی (0/55± 68/81 و 0/67± 67/77، به ترتیب در حضور و عدم حضور EGTA) بود. در محیط فاقد کلسیم و حاوی EGTA تکوین جنین 3 و 5روزه، به ترتیب 1/38± 53/65 و 2/85± 46/21 نسبت به سایر گروه های انجمادی بالاتر بود (0/05p<). شمارش سلولی بلاستوسیست تفاوت معنی داری بین گروه های انجمادی و گروه کنترل نشان نداد. نتیجه گیری: استفاده از سیستم انجمادی بدون کلسیم از طریق افزودن EGTA می تواند سبب بهبود کیفیت تخمک بالغ گوسفندی پس از انجماد و بهبود تکوین جنین های حاصل شود.

اهداف: هدف مطالعه حاضر، مقایسه انجماد شیشه ای تخمک های بالغ موشی از نظر درصد زنده مانی، تشکیل مجدد دوک تقسیم میوزی و جابه جایی آن بین سیستم های باز و بسته است. مواد و روش ها: 131 تخمک بالغ از موش های 8-6 هفته نژاد BALB/C که حاوی دوک میوزی بودند در دو گروه سیستم باز و بسته انجماد شیشه ای تقسیم بندی شدند. پس از در معرض قرارگیری تخمک ها در محیط های انجماد، در گروه باز بر روی کرایوتاپ و در سیستم بسته بر روی Rapid-i قرار گرفتند و منجمد شدند. بعد از عمل ذوب، تخمک ها به مدت 3 ساعت انکوبه شدند. میزان زنده مانی، حضور و محل تشکیل مجدد دوک با استفاده از میکروسکوپ پلی سکوپ بررسی شد. یافته ها: میزان زنده مانی در گروه سیستم باز به طور معنی داری بالاتر از سیستم بسته بود (به ترتیب91/1% در مقابل 6/68%). در سیستم بسته و باز به ترتیب 81/3% و 51/3% تخمک های زنده مانده حاوی دوک میوزی بودند (0/05p<). همچنین درصد جایگاه طبیعی دوک تقسیم میوزی در گروه بسته به طور معنی داری بیشتر بود. نتیجه گیری: اگرچه زنده مانی در گروه سیستم باز بیشتر از سیستم بسته است، اما سیستم بسته قادر به حفظ بهتر دوک های میوزی و حفظ جایگاه طبیعی آن است. همچنین استفاده از میکروسکوپ پلی سکوپ برای بررسی دوک های میوزی در تخمک های منجمدشده ضروری به نظر می رسد.

اهداف: با وجود اثربخشی درمان های دارویی رایج در کاهش بار ویروس HIV-1 در بدن، این روش ها درمان قطعی محسوب نمی شوند، زیرا نمی توانند ذخایر ویروسی پنهان را نابود کنند و از طرفی، امکان مقاوم شدن ویروس به این داروها نیز وجود دارد. بنابراین، ارایه راهکارهای درمانی ایمن تر و موثرتر ضروری است که از آن جمله می توان به مهار ژن ها توسط siRNA اشاره کرد و خود نیازمند روش های ایمن و موثر انتقال به درون سلول های هدف است. مواد و روش ها: در این مطالعه، یک ساختار اختصاصی siRNA بر علیه ژن HIV-1 nef طراحی و سنتز شد و سپس اقدام به توسعه یک رده سلولی پایدار HEK293 بیان کننده HIV-1 nef شد. در ادامه، پس از ساخت و ارزیابی SPION (نانوذرات اکسیدآهن سوپرپارامغناطیس) با پوشش تری متیل کیتوزان، مهار (خاموش سازی) ژن nef در رده سلولی پایدار فوق با کمک نانوذرات مذکور (به عنوان حامل siRNA) مورد بررسی قرار گرفت. یافته ها: نانوذرات اکسیدآهن (کروی شکل با اندازه میانگین 85نانومتر و پتانسیل سطحی برابر 29+میلی ولت) در انتقال siRNA به درون سلول های HEK293 در مقایسه با گروه های کنترل به طور قابل ملاحظه ای موثر بوده اند و در عین حال دارای سمیت پایین برای سلول ها بودند. همچنین، استفاده از نانوذرات دارای siRNA بر علیه ژن nef منجر به مهار حدود 85% بیان ژن مذکور در سلول های پایدار (نسبت به سلول های کنترل) شد. نتیجه گیری: نانوذرات بهینه SPION با پوشش تری متیل کیتوزان می توانند به عنوان یک روش کارآمد در اهداف درمانی HIV-1 مورد استفاده قرار گیرند. با این وجود، بررسی سودمندی این نانوذرات (حامل دارو و یا siRNA) در شرایط در محیط زنده برای اهداف بالینی ضروری است.