یاخته
سال:1388 | دوره:11 | شماره:3 (43) |تعداد مقالات:11

یکی از معضلات جراحان ارتوپد و متخصصین فک و صورت بازسازی ضایعات بافت استخوان است که در چنین مواردی پیوند استخوان و ایمپلنت های فلزی به طور رایج انجام می شود. محدودیت های موجود سبب شده تا توجه محققین به سمت فناوری های نوین نظیر مهندسی بافت استخوان معطوف شود. مهندسی بافت استخوان علمی است که برای ساخته شدن یک سازه استخوانی به همکاری چندین رشته از جمله علوم زیستی و مهندسی نیاز دارد. اهداف دانشمندان درگیر در مهندسی بافت عبارت است از: طراحی و ساخت داربست با ویژگی های فیزیکی و شیمیایی مناسب، فراهم آوردن شرایط مناسب در داخل داربست جهت تمایز سلولی و به کارگیری سازه ساخته شده در نقایص بافتی. در مقاله حاضر، اجزای اصلی درگیر در یک فرایند مهندسی بافت استخوان شامل سلول بنیادی مزانشیمی، داربست، فاکتورهای رشد و بیوراکتور و هم چنین رویکردهای مهندسی بافت جهت بازسازی ضایعات بافتی مرور شده است.

هدف: بررسی کلون و بیان ژن hpaA هلیکوباکتر پیلوری در E.coli.مواد و روش ها: DNA ژنومی از سویه استاندارد هلیکوباکترپیلوری 59662 به عنوان الگو برای تکثیر ژن hpaA با PCR مورد استفاده قرار گرفت. سپس ژن hpaA در وکتور بیانی پروکاریوتی pET28a وارد شد (pET28a-hpaA). آنگاه پلاسمید نوترکیب برای ترانس فورماسیون E.coli Dh5a به کار رفت و کلون های مثبت انتخاب شدند. پس از ترانس فورماسیون باکتری E.coli BL21DE3 با پلاسمید نوترکیب pET28a-hpaA، بیان پروتئین HpaA با غلظت های مختلف ایزوپروپیل تیو بتا دی گالاکتوزید (IPTG) القا و با SDS-PAGE شناسایی گردید. ایمنی زایی پروتئین rHpaA با استفاده از آنتی بادی های پلی کلونال خرگوشی علیه آنتی ژن های کامل هلیکوباکتر پیلوری با آزمون وسترن بلاتینگ تعیین شد.نتایج: توالی ژن hpaA در وکتور پلاسمیدی pET28a-hpaA مطابق با توالی ژن hpaA سویه استاندارد بوده و نتایج SDS-PAGE نشان داد که سیستم بیانی پروکایوتی در غلظت 1.5mmol-L از IPTG پروتئین نوترکیب hpaA را با کیفیت خوب بیان می کند. پروتئین نوترکیب rHpaA به خوبی با آنتی بادی های تولید شده علیه هلیکوباکتر پیلوری در وسترن بلاتینگ واکنش داد.نتیجه گیری: در این بررسی سیستم بیانی پروکاریوتی pET-28a-hpaA-BL21 با کارایی زیاد به طور موفق ساخته شد و پروتئین نوترکیب rHpaA ایمنی زایی قابل قبولی از خود نشان داد. این نتایج نشان می دهد تولید پروتئین های اختصاصی نوترکیب نظیر HpaA استراتژی جایگزین و مناسبی برای ساخت واکسن هلیکوباکتر پیلوری می باشد.

هدف: بررسی اثر القایی BMP4 و Activin A بر سلول های بنیادی جنینی موشی به نورون های حد واسط پشتی.مواد و روش ها: پیش سازهای عصبی بر گرفته از سلول های بنیادی جنینی موشی تحت 4 گروه مختلف تیماری، مشتمل بر BMP4 (1ng/ml, 10ng/ml) و Activin A (100ng/ml) و A activin=BMP4 (100ng/ml, 10ng/ml) قرار گرفتند. تاثیر این القائات بر بیان مارکرهای ویژه نورورن های حد واسط پشتی در سلول های عصبی بالغ تمایز یافته با استفاده از روش های ایمونوسایتوشیمی و RT-PCR مورد ارزیابی قرار گرفت.نتایج: تیمار پیش سازهای عصبی با استفاده از BMP4 و Activin A یا هر دو تیمار هم زمان القاکننده، منجر به تولید نورون های حد واسط dl1 و dl3 (Lhx2 و lsl1 مثبت) در مقایسه با گروه کنترل شد. اگرچه نورون های حد واسط های dl3 در تیمار هم زمان دو القاکننده مشاهده نگردید. علاوه بر این آنالیز RT-PCR سلول های تمایز یافته، بیان فاکتورهای رونویسی Lhx9، Lhx1 و lsl1 را نشان داد که به ترتیب مارکرهای نورورن های حد واسط های dl1، dl2 و dl3 می باشند.نتیجه گیری: نتایج نشان داد که ترکیب خاصی از مولکول های پیام رسان در تکوین می توانند به طور مستقیم منجر به تمایز سلول های بنیادی جنینی به نورون های حد واسط پشتی شوند. به علاوه تفاوت های کمی و کیفی در پیام رسانی به واسطه اعضا مختلف خانواده TGF-b می تواند در تخصص یافتگی انواع مختلفی از نورون های حد واسط پشتی، نقش ایفا کند.

هدف: بررسی سیگنالینگ کلسیم درگیر در تقویت طولانی مدت سیناپس های تحریکی بر روی نورون های گابائرژیک تخلیه سریع پارواآلبومین مثبت قشر بینایی موش.مواد و روش ها: در این مطالعه برش های مغز از موش های GAD67-GFP knock-in مورد استفاده قرار گرفت. با استفاده از روش ثبت Whole Cell Patch و به دنبال آن رنگ آمیزی ایمونوهیستوشیمی در سلول های پارواآلبومین مثبت Fast-Spiking GABAergic (FS-GABA) (Parval-Bumin Positive; PV*) سیگنالینگ Ca2+ درگیر در تقویت طولانی مدت (long-Term Potentiation; LTP) تحریکی این زیر گروه نورون های واسطه قشر بینایی بررسی شد.نتایج: مهارکننده فسفولیپاز (Phospholypase C; PLC) c یعنی داروی U-73122 در 10 میکرومولار، مهارکننده های IP3 (از قبیل 2-APB، 3 میکرومولار و هپارین (10 واحد بر میلی لیتر) و مهارکننده آزادسازی کلسیم از منابع داخل سلولی (CPA، 5 میکرومولار)، مسیر سیگنالینگ mGluR-5 را در القای LTP سیناپس های تحریکی به سلول تخلیه سریع PV* قشر بینایی مهار کرد، در حالی که ماده حلال به تنهایی چنین اثری نداشت.نتیجه گیری: نتایج بیانگر این است که mGluR-5 در نورون های FS-GABA سبب فعال شدن PLC و IP3 می گردد. هم چنین کلسیم مورد نیاز برای القا و حفظ LTP از منابع داخل سلولی کلسیم تامین می گردد. با در نظر گرفتن نقش کلیدی نورون های مهاری PV*FS در مدارهای قشر بینایی به نظر می رسد که LTP وابسته به گیرنده های گلوتاماتی متابوتروپیک، درسیناپس هایی که بین سلول های تحریکی و نورون های FS وجود دارد، نقش مهمی را در شکل پذیری سیناپسی قشر بینایی ایفا می کند.

هدف: بررسی بروز RANKLmRNA در فرایند تحلیل ریشه ناشی از حرکات دندانی در رت.مواد و روش ها: به منظور ایجاد حرکت مزیالی در 20 رت نر هفت هفته ای نژاد Wistar، فنر (Germany Dentaurum) closed coil به دندان ها متصل شد که برای هر جانور، دندان سمت مقابل قوس فکی به عنوان گروه کنترل داخلی به کار گرفته شد. در روز 21 جانوران کشته شدند. بافت دندانی 10 جانور به منظور آزمایشات هیستولوژیک در پارافین محصور (Embed) و بافت حاصل از تراش لاکوناهای تحلیل در سمت مزیال ریشه دندان های مولر سایر جانوران برای استخراج mRNA در آزمایشات RT-PCR به کار گرفته شد.نتایج: برش های هیستولوژیک، مورد بررسی های هیستومورفومتریک قرار گرفتند و نتایج بیانگر تفاوت معنی دار بین میزان تحلیل ریشه در گروه مورد در مقایسه با گروه شاهد بود (P<0.001). آنالیز دانسیتومتریک نوارهای بروز RANKL mRNA روی ژل الکتروفورز، نشان دهنده افزایش معنی دار در بروز RANKL mRNA در لاکوناهای تحلیلی گروه مورد بود (P<0.001).نتیجه گیری: نتایج به دست آمده، نشانگر بروز (Receptor Activator for Nuclear Factor Kappa B Ligand) RANFKL به همراه تحلیل ریشه ناشی از حرکات دندانی بوده است.

هدف: بررسی تاثیر سلول های کومولوس بر روی بلوغ، لقاح و تکامل جنین موش تا مرحله بلاستوسیست.مواد و روش ها: در کل تعداد 470 تخمک در مرحله Germinal Vesicle (GV) از 26 تخمدان موش نژاد 4-6 ICR هفته ای پس از تزریق 5 واحد Pregnant Mare Serum Gonadotropin (PMGS) به دست آمد. تخمک های جمع شده به دو گروه تقسیم شدند. گروه اول: تخمک های بدون سلول های کومولوس و گروه دوم: تخمک های با سلول های کومولوس، تخمک های هر دو گروه در محیط TCM-199 با 10 درصد سرم جنین گاو به مدت 22-24 ساعت در دمای 37 و 5 درصد در داخل انکوباتور کشت داده شدند. سپس با میکروسکوپ معکوس بررسی شدند. جهت انجام لقاح آزمایشگاهی تخمک های بالغ از هر یک از گروه ها در محیط T6 قرار گرفتند و اسپرم به آنها اضافه گردید. تخمک های لقاح یافته جهت بررسی مرحله دو سلولی به مدت 24 ساعت و ایجاد بلاستوسیست به مدت 120 ساعت پس از لقاح ارزیابی شدند. در انتها اطلاعات به دست آمده با استفاده از آزمون کای اسکور با دقت P<0.05 جهت تجزیه و تحلیل داده ها استفاده گردید.نتایج: درصد بلوغ، لقاح، تسهیم و تشکیل بلاستوسیست در تخمک های بدون کومولوس به ترتیب 33.76 درصد، 49.57 درصد، 49.57 درصد، 15.51 درصد و 14.19 درصد و در تخمک های دارای سلول های کومولوس به ترتیب 41.89 درصد، 76.80 درصد، 58.75 درصد و 62.45 درصد بودند. نتایج نشان داد تمام موارد ارزیابی شده در تخمک های دارای سلول های کومولوس به طور معنی داری (P<0.05) بیشتر از تخمک های بدون سلول کومولوس بوده است.نتیجه گیری: مطالعه حاضر نشان داد که اتصال سلول های کومولوس به تخمک در طی بلوغ و لقاح جهت بلوغ هسته، لقاح و تکامل بعدی جنین تا مرحله بلاستوسیست مهم می باشد.

هدف: بررسی انتشار ویروس نیوکاسل از نژاد AF2240 در کبد حین تزریق داخل توموری در سرطان پستان ایجاد شده به وسیله رده سلولی 4T1 در موش ماده از نژاد BALB/c.مواد و روش ها: دویست موش ماده از نژاد BALB/c به طور تصادفی به ده گروه شامل: موش های سرطانی شاهد (Cancer Control; CC)، سرطانی تحت معالجه با 0.5 میکروگرم در میلی لیتر تاموکسی فن سیترات (Citrate en Tamoxif; CT)، سرطانی تحت معالجه با 8، 16، 32 و 64 واحد HA به ترتیب با نام های C/NDV8، C/NDV16، C/NDV32 و C/NDV64؛ سرطانی تحت معالجه با 8، 16، 32 و 64 واحد HA به همراه 0.5 میکروگرم در میلی لیتر تاموکسی فن سیترات به ترتیب با نام های C/NDV8، C/NDV16، C/NDV32 و C/NDV64 تقسیم گردید. در این پروژه تحقیقاتی از تکنیک Co-Culture جهت ایجاد سرطان پستان و تزریق دوزهای مختلف ویروس و تاموکسی فن به مدت چهار هفته به طور روزانه استفاده گردید. با استفاده از روش های مولکولی in situ RT-PCRT، کنفوکال لیزر اسکنینگ ماکروسکوپی (Confocal Laser Scanning Microsocopy; CLSM) و نگاتیو استینینگ الکترون ماکروسکوپی (Negative Staining Electron Microscopy; NSEM) رهگیری و ردیابی ویروس بیماری نیوکاسل از نژاد FA2240 در خلال تزریق داخل توموری در موش ماده از نژاد BALB/c در بافت های تومور پستان و کبد بررسی گردید.نتایج: هر سه تکنیک مولکولی یاد شده به طور موفقیت آمیزی ویروس را در تومور و کبد کشف و ردیابی نمودند.

هدف: بررسی شیوع چهار پلی مورفیسم متیل ترانس فراز (Thiopurine S-methyl Transferase; TPMT) در جمعیت ایرانی.مواد و روش ها: این تحقیق در طی سال های 1385-1386 در گروه هماتولوژی دانشگاه تربیت مدرس انجام شده است. با استفاده از تکنیک های PCR-RFLP و Specific PCR چهار پلی مورفیسم شایع با نام های TPMT*3C (A719G), TPMT*2 (G238C), TPMT*3B (G460A) و (G460A and A719G) TPM*3A در یک جمعیت نرمال 127 ایرانی مورد بررسی قرار گرفت.نتایج: در این مطالعه شیوع 7.08 درصد برای پلی مورفیسم TPMT*2، 2.47 درصد و 2.18 درصد به ترتیب برای پلی مورفیسم های TPMT*3C و TPM*3C ایجاد شد. در حالی که پلی مورفیسم TPMT*2 با شیوع 7.08 درصد می باشد. این بررسی می تواند در سیاست گذاری های ملی در درمان بیمارانی که محتاج به استفاده از داروهای تیوپورینی می باشند همانند بیماران مبتلا به (ALL) Acute Lymphoblastic Leukemia کمک کننده و موجب ارتقای استانداردهای درمانی این بیماران در سطح کشور باشد.

هدف: مطالعه معرفی انجماد شیشه ای به عنوان یک روش مفید برای نگهداری سلول های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان.مواد و روش ها: سلول های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان بر اساس قابلیت چسبیدن آنها به کف ظروف کشت جدا گردید. این سلول ها با روش انجماد شیشه ای و نی فرانسوی با اتیلن گلیکول، فایکول، سوکروز -70 منجمد و در نیتروژن مایع نگهداری شدند. مورفولوژی و بقا سلول های ذوب شده به وسیله تریپان بلو مورد ارزیابی قرار گرفت و سلول های تازه و منجمد تحت القا مدیوم استئوژنز و آدیپوژنز به استئوسیت و چربی تمایز یافته اند.نتایج: میزان بقا سلول های بنیادی مزانشیمی قبل از انجماد 88.16±6.30، با روش انجماد شیشه ای 81.33±6.83 و با روش نی فرانسوی 80.83±6.40 دیده شد. هم چنین کشت سلول ها در هر دو روش مورفولوژی مشابه داشته و از نظر تشکیل کلونی نیز مشابه با سلول های تازه بوده است. به علاوه، سلول های ذوب شده در مدیوم استئوژنز قابلیت استخوان زایی را نشان داده و رسوب مواد معدنی با رنگ آمیزی آلیزارین قرمز مشاهده گردید. هم چنین تحت شرایط تمایز چربی، سلول های تازه و منجمد شده به سلول های چربی تمایز یافته و تجمع چربی با رنگ آمیزی اویل قرمز تایید شد.نتیجه گیری: انجماد شیشه ای یک روش قابل اطمینان برای نگهداری این سلول هاست.

هدف: بررسی تاثیر عصاره دانه هویج (Carrot Seed Etxract: CSE) بر روی اسپرماتوژنز، تعداد و تحرک اسپرم ها در اپیدیدیم کودا (Cauda Epididyme) در موش صحرایی نر.مواد و روش ها: چهل موش صحرایی نر بالغ، به طور تصادفی به پنج گروه مساوی تقسیم شدند: گروه کنترل، گروه های دریافت کننده CSE با غلظت پایین و بالا، گروه دریافت کننده CSE با دوز بالا همراه با جنتامایسین و گروه دریافت کننده جنتامایسین. بعد از چهار هفته تیمار حیوانات، سرم آنها بعد از یک شب ناشتایی جهت اندازه گیری هورمون های جنسی جمع آوری شد. تحت بیهوشی، بیضه ها، اپیدیدیم کودا و لوله های اسپرمی جدا و تعداد اسپرم، تحرک و میزان ذخیره اسپرمی اپیدیدیم کودا و لوله های اسپرمی جدا و تعداد اسپرم، تحرک و میزان ذخیره اسپرمی اپیدیدیم کودا تعیین گردید. تغییرات هیستوپاتولوژیک بیضه ها نیز برای ارزیابی میزان اسپرماتوژنز مطالعه گردید. با استفاده از ANVOVA یک طرفه و Tukey HST، نتایج مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت.نتایج: تجویز CSE موجب افزایش معنی داری در میزان ذخیره اسپرمی اپیدیدیم کودا در مقایسه با گروه کنترل شد (به ترتیب 1.45±2 در مقایسه با 28.2±1.8 میلیون). عصاره مذکور هم چنین بیضه ها را از تاثیر نکروتیک جنتامایسین محافظت نمود. تجویز CSE موجب افزایش 3.5 برابری سطح Luteinizing Hormone (LH) گردید که علی رغم دریافت جنتامایسین به مقدار 5 میلی گرم بر کیلوگرم هر روز بوده است در حالی که تاثیر معنی داری بر سطح Follicle Stimulating Hormone (FSH) نداشته است. غلظت تستوسترون در گروه دریافت کننده CSE به میزانه 400 میلی گرم بر کیلوگرم هر روز، نسبت به گروه کنترل و گروه دریافت کننده جنتامایسین به ترتیب 30 و 83 درصد بیشتر بود.نتیجه گیری: عصاره دانه هویج از اثر سمی جنتامایسین بر روی سیستم تولیدمثل موش صحرایی نر جلوگیری کرده و با افزایش سطح تستوسترون، میزان اسپرماتوژنز را افزایش داد. این امر نشان می دهد که اثر CSE بر روی سیستم تولیدمثل، وابسته به جنس بوده است.