دنیای میکروب ها
سال:1393 | دوره:7 | شماره:3 (پیاپی 20) |تعداد مقالات:8

سابقه و هدف: رشد مناسب شترمرغ به هورمون رشد آن و تغذیه بستگی دارد. هورمون رشد شترمرغ یک پلی پپتید است که موجب تحریک رشد و تکثیر سلول ها می شود. هدف از این مطالعه همسانه سازی و تولید دو سازواره ژنی به منظور بیان هورمون رشد شترمرغ در سیستم های پروکاریوتی و یوکاریوتی می باشد.مواد و روش ها: در این پژوهش، RNA از غده هیپوفیز شترمرغ تخلیص شد و cDNA آن به روش رونوشت برداری معکوس تهیه گردید.cDNA حاصل، به روش همسانه سازی T/A در پلاسمید TOPO کلون شد. سپس ساب کلونینگ cDNA هورمون رشد شترمرغ در وکتورهای pcDNA3.1 و pET32 انجام شد.یافته ها: همسانه سازی cDNA هورمون رشد شترمرغ در پلاسمید TOPO با موفقیت انجام شد و روش های PCR و هضم اندونوکلئازی، صحت کلون سازی را تایید نمود. پس از ساب کلونینگ این cDNA، پلاسمیدهای نوترکیب، pcDNA3.1-gh و pET32-gh حاصل گردید و سازواره های حاصل توسط هضم آنزیمی تایید گردیدند.نتیجه گیری: با استناد به نتایج به دست آمده در این مطالعه به نظر می رسد که سازه های ژنی تازه ساخته شده در این پژوهش می تواند به عنوان یک راهکار مناسب برای تولید صنعتی هورمون رشد شترمرغ مورد استفاده قرار گیرند.

سابقه و هدف: آلفا آمیلاز یک اندونوکلئاز می باشد که با شکستن پیوند داخلی آلفا 1 و 4 آمیلوز، آمیلوپکتین و گلیکوژن را هیدرولیز می نماید. امروزه گونه های مختلف جنس باسیلوس منبع مهمی در تولید این آنزیم به شمار می روند. این مطالعه با هدف همسانه سازی و بیان ژن کد کننده آلفا آمیلاز (amyS) از باکتری باسیلوس لیکنیفورمیس و تعیین خصوصیات بیوشیمیایی آنزیم نوترکیب انجام شد.مواد و روش ها: توالی ژن مربوط به آنزیم آلفا آمیلاز با استفاده از روش واکنش زنجیره ای پلی مراز در باسیلوس ردیابی و جداسازی گردید. قطعات مورد نظر در ناقل بیانی pET-26b(+) وارد شدند. پس از توالی یابی قطعات، ناقلین نوترکیب به باکتری بیانی اشرشیا کلی BL21(DE3) منتقل و بیان شدند. به منظور خالص سازی آنزیم نوترکیب از فیلتر آمیکون و کیسه دیالیز استفاده شد. برای اندازه گیری فعالیت آنزیم آلفا آمیلاز از روش دی نیترو سالیسیلیک اسید استفاده گردید.یافته ها: نتایج این تحقیق نشان دهنده بیان فراوان آنزیم آلفا آمیلاز در سیستم های بیانی غیر از خود باکتری باسیلوس بود. بر اساس الکتروفورز بر روی ژل SDS-PAGE، وزن مولکولی آنزیم نوترکیب معادل 54 کیلو دالتون گزارش گردید. همچنین آنزیم دارای فعالیت نسبی 4.77 واحد در میلی لیتر بود.نتیجه گیری: نتایج این تحقیق بیانگر بیان فراوان این آنزیم در سیستم های بیانی دیگر می باشد. اهمیت این سیستم به دلیل وجود پروموتر قوی T7 است. به دلیل بیان ترشحی آنزیم مورد نظر و در نتیجه تاخوردن صحیح و حفظ فعالیت آنزیم، استفاده از این سیستم در مقیاس صنعتی پیشنهاد می گردد.

سابقه و هدف: عفونت دستگاه تنفسی یکی از شایع ترین بیماری های عفونی در جهان است که در اثر التهاب حاد دستگاه تنفس فوقانی توسط حمله باکتری هایی مانند استافیلوکوکوس اورئوس به این قسمت ایجاد می گردد. هدف از این مطالعه بررسی پلی مورفیسم ژن کواگولاز استافیلوکوکوس اورئوس جدا شده از عفونت های دستگاه تنفسی در شهرکرد می باشد.مواد و روش ها: این مطالعه مقطعی- توصیفی بر روی 200 نفر از افراد مشکوک به عفونت های دستگاه تنفس فوقانی مراجعه کننده به کلینیک امام علی شهرستان شهرکرد صورت گرفت. از محیط های بلاد آگار و مانیتول سالت آگار برای کشت نمونه ها استفاده شد. کلنی های مشکوک توسط آزمون های میکروب شناسی شناسایی شدند. در نهایت پس از استخراج DNA، محصول PCR در حضور آنزیم AluI مورد هضم آنزیمی واقع گردید و ژنوتیپ ژن کواگولاز به روش RFLP تعیین شد.یافته ها: در مجموع 60 نفر (30%) از افراد مورد بررسی به استافیلوکوکوس اورئوس آلوده بودند. 42 جدایه دارای باند 970 جفت بازی و 18 جدایه دارای باند 730 جفت بازی بودند. پس از هضم محصول PCR با آنزیمAluI ، در 42 جدایه سه باند 160، 320 و 490 جفت باز (ژنوتیپ I)، در 16 جدایه دو باند 240 و 490 جفت باز (ژنوتیپ VIII) و در 2 جدایه دو باند 320 و 410 جفت باز (ژنوتیپ IX) مشاهده گردید.نتیجه گیری: نتایج به دست آمده نشان می دهد که جدایه های استافیلوکوکوس اورئوس کواگولاز مثبت جدا شده از عفونت دستگاه تنفسی در شهرکرد بیشتر متعلق به ژنوتیپ نوع I می باشند که می تواند منبع بالقوه ای برای انتشار این ژنوتیپ در جامعه محسوب گردد.

سابقه و هدف: لیستریا منوسیتوژنز یکی از عوامل ایجاد کننده عفونت بدون علامت دستگاه ادراری-تناسلی است که می تواند موجب عفونت نوزادان و مرگ جنین شود. با توجه به چالش های ناشی از کشت این باکتری، این پژوهش با هدف تشخیص لیستریا در ادرار به کمک واکنش زنجیره ای پلی مراز با استفاده از پروب فلوئورسنتی انجام شد.مواد و روش ها: این پژوهش به صورت مقطعی-توصیفی بر روی 100 نمونه ادرار بیماران مراجعه کننده به مرکز تخصصی زنان و زایمان در شهرهای لارستان و جهرم انجام شد. ابتدا با استفاده از سویه استاندارد حساسیت تکنیک مورد ارزیابی قرار گرفت. سپس پروب ژن hly-A طراحی و با استفاده از واکنش زنجیره ای پلی مراز، میزان فلوئورسنت با دستگاه ردیاب فلوئورسنت تعیین گردید.یافته ها: با استفاده از سنجش FLASH-PCR محدوده ردیابی 5 تا 10 ژن باکتری در هر واکنش تعیین شد. از مجموع 100 نمونه بالینی، در 30 مورد (30%) با استفاده از پروب فلئورسنتی ژن hly-A لیستریا شناسایی گردید.نتیجه گیری: نتایج این مطالعه نشان داد که برای شناسایی مولکولی لیستریا، پروب فلورسنتی سرعت، حساسیت و ویژگی بالایی دارد و می تواند جایگزین مناسبی برای الکتروفورز باشد. از این رو با توجه به دقت و غیر تهاجمی بودن این روش، انجام مطالعات گسترده تر به منظور پایش لیستریا در نمونه های بالینی پیشنهاد می گردد.

سابقه و هدف: در پژوهش های مختلف نشان داده شده است که قارچ ها می توانند در افراد مستعد منجر به شکل گیری آسم آلرژیک شوند. از مهمترین قارچ های آلرژی زای شایع، می توان به آلترناریا، آسپرژیلوس ها و پنیسیلینیوم ها اشاره نمود. این مطالعه با هدف شناسایی و بررسی الگوی فراوانی باندهای آلرژی زا در قارچ های آلترناریا آلترناتا، آسپرژیلوس فومیگاتوس و پنیسیلیوم سیترینوم و همچنین مقایسه بین آنها انجام شد.مواد و روش ها: این پژوهش به صورت مقطعی-توصیفی بر روی 48 بیمار مبتلا به آسم و 22 فرد سالم به عنوان کنترل انجام شد. در ابتدا قارچ ها کشت داده شده و عصاره سلولی آنها به روش انجماد و ذوب به دست آمد. اجزای پروتئینی با روش SDS-PAGE جداسازی شده و پس از انتقال به کاغذ نیتروسلولز، ایمونوبلاتینگ بر علیه سرم بیماران آسمی و گروه کنترل انجام شد.یافته ها: پس از انجام ایمونوبلاتینگ برای آلترناریا آلترناتا 6 باند آلرژی زای 49 تا 115 کیلودالتونی، برای آسپرژیلوس فومیگاتوس 4 باند آلرژی زای 57 تا 112 کیلودالتونی و برای پنیسیلیوم سیترینوم نیز 5 باند 37 تا 127 کیلودالتونی شناسایی گردید.نتیجه گیری: در بین قارچ های مورد بررسی، آلترناریا آلترناتا بیشترین باندهای آلرژی زا را داشت. به نظر می رسد باندهای دارای وزن مولکولی بالاتر، توانایی بیشتری را در تحریک اختصاصی IgE داشته باشند.

سابقه و هدف: مایکوپلاسماها یکی از عوامل میکروبی ناباروری در انسان می باشند. مایکوپلاسماهای تناسلی اثرات مخربی بر اندام های تناسلی داشته و موجب اختلالات باروری و مرگ نوزادان می گردند. این مطالعه با هدف تعیین هویت مولکولی مایکوپلاسما هومینیس جدا شده از دستگاه تناسلی زنان و مردان نابارور در کرمان انجام شد.مواد و روش ها: این مطالعه به صورت توصیفی بر روی 100 زن و 100 مرد نابارور مراجعه کننده به مرکز ناباروری کرمان به مدت 6 ماه به صورت هدف دار انجام شد. نمونه های مایع منی و سواپ واژینال برای بررسی وجود مایکوپلاسما هومینیس با روش واکنش زنجیره ای پلی مراز مورد آزمایش قرار گرفتند. محصول PCR نمونه های مثبت برای تعیین هویت مولکولی انتخاب گردیدند. همردیف کردن توالی نمونه ها با استفاده از نرم افزار MEGA 5 و با روش Neighbor-joining انجام گرفت.یافته ها: در این مطالعه 45 درصد از نمونه های مردان آلوده به جنس مایکوپلاسما بودند. از این میان فراوانی گونه مایکوپلاسما هومینیس 33 درصد بود. همچنین 43 درصد از نمونه های زنان آلوده به جنس مایکوپلاسما بودند. از این میان فراوانی گونه مایکوپلاسما هومینیس 41.8 درصد بود. آنالیز توالی های مایکوپلاسما هومینیس های جدا شده نشان داد که جدایه ها در 5 دودمان کاملا مجزا قرار می گیرند.نتیجه گیری: در این پژوهش مایکوپلاسما هومینیس به عنوان مهم ترین عامل میکروبی مایکوپلاسمایی ناباروری در جامعه آماری مورد مطالعه مطرح بود. تجزیه و تحلیل توالی نوکلئوتیدی جدایه ها، تشابه ژنوتیپی بسیار ناچیزی را بین برخی از جدایه ها نشان داد. در نتیجه می توان این جدایه ها را در گروه های متفاوت به عنوان سویه بومی ایران طبقه بندی نمود.

سابقه و هدف: توده زیستی میکروبی توانایی زیادی برای پالایش فلزات سنگین در محلول های آلوده دارند. این مطالعه با هدف جداسازی و شناسایی باکتری های مقاوم به کادمیوم و نیکل از خاک آلوده به فلزات سنگین و ارزیابی میزان تجمع زیستی و جذب زیستی کادمیوم و نیکل توسط این باکتری ها در محلول های رقابتی حاوی غلظت های مختلف کادمیوم و نیکل انجام شد.مواد و روش ها: در این مطالعه توصیفی، از خاک آلوده به لجن فاضلاب مزارع مجاور تصفیه خانه غرب اهواز نمونه برداری گردید. باکتری های مقاوم به کادمیم و نیکل جداسازی و با آزمون های بیوشیمیایی شناسایی گردیدند. حداقل غلظت بازدارنده کادمیم و نیکل برای این باکتری ها تعیین شد. به منظور بررسی میزان تجمع زیستی و جذب زیستی کادمیم و نیکل، پس از آماده سازی باکتری های زنده یا غیرفعال و نیز محلول های حاوی غلظت مساوی از کادمیم و نیکل، مقادیر این فلزات سنگین به وسیله دستگاه جذب اتمی اندازه گیری شد.یافته ها: در این مطالعه باکتری های جداسازی شده به جنس های باسیلوس، استافیلوکوکوس و اکتینومیست تعلق داشتند. از این میان اکتینومیست بیشترین مقدار تجمع زیستی را برای هر دو فلز نشان داد. در غلظت های کمتر مقدار تجمع زیستی کادمیم و نیکل بیشتر از جذب زیستی بود. اما در سطوح آلودگی بالا مقدار جذب زیستی بیشتر بود. در هر دو روش زیست پالایی، باکتری ها توانایی بیشتری برای پالایش کادمیم نسبت به نیکل داشتند.نتیجه گیری: باکتری های موجود در خاک های آلوده به فلزات سنگین مقاومت زیادی در برابر غلظت زیاد این عناصر پیدا می کنند. هر دو روش تجمع زیستی و جذب زیستی پتانسیل بالایی برای پالایش محیط های آبی دارند. با این تفاوت که تجمع زیستی در غلظت های کم و جذب زیستی در غلظت های بالای فلزات کارایی بیشتری دارند.

سابقه و هدف: در حدود 98 درصد پتاسیم موجود در خاک به شکل کانی های معدنی است که برای گیاهان قابل استفاده نمی باشد. باکتری های حل کننده پتاسیم قادرند سیلیکات های معدنی حاوی پتاسیم را تجزیه کرده و پتاسیم قابل جذب برای گیاهان آزاد کنند. این مطالعه با هدف جداسازی باکتری های حل کننده پتاسیم از خاک ریزوسفری گیاهان و بررسی توانایی جدایه ها در محلول سازی سیلیکات ها جهت آزادسازی پتاسیم انجام شد.مواد و روش ها: باکتری های حل کننده پتاسیم از نمونه های خاک ریزوسفری گیاهان مختلف جداسازی شدند. جدایه ها در محیط کشت الکساندروف کشت و بر اساس تشکیل هاله ناشی از حلالیت پتاسیم بررسی شدند. جدایه ها، با استفاده از روش های ماکروسکوپی، میکروسکوپی، بیوشیمیایی و مولکولی مورد شناسایی قرار گرفتند. به منظور تخمین کمی پتاسیم آزاد شده توسط جدایه ها در محیط مایع الکساندروف و در خاک از روش فلیم فوتومتری استفاده شد.یافته ها: از مجموع 30 جدایه با قابلیت آزادسازی پتاسیم، تعداد 5 جدایه توانایی بالایی در حلالیت پتاسیم داشتند. مطالعات بیوشیمیایی و مولکولی نشان داد که جدایه ها متعلق به سه جنس باسیلوس، پانی باسیلوس و سودوموناس بودند. بررسی های فلیم فوتومتری نشان داد که مقدار پتاسیم آزاد شده توسط جدایه ها بین 950 تا 1250 میلی گرم بر لیتر در محیط مایع و بین 525 تا 550 میلی گرم بر کیلوگرم در خاک بود.نتیجه گیری: باکتری های حل کننده پتاسیم از ریزوسفر خاک هایی با توانایی بالای تثبیت پتاسیم جداسازی و شناسایی گردیدند. این جدایه ها توانایی قابل ملاحظه ای در حلالیت کانی ها و آزادسازی پتاسیم معدنی قابل جذب دارند و می توانند در تولید کودهای بیولوژیک به منظور افزایش میزان پتاسیم در دسترس خاک و بهبودی رشد و بازدهی گیاهان زراعی مورد استفاده قرار گیرند.