تازه های بیوتکنولوژی سلولی مولکولی
سال:1399 | دوره:10 | شماره:39 |تعداد مقالات:8

سابقه و هدف: عفونت های ناشی از اشریشیاکلی در طیور انتشار جهانی دارد. سروتیپ های O1، O2، O8، O35 و O78، اشریشیاکلی در ایجاد بیماری کلی باسیلوز نقش دارند. ژن هایی مانند F17، SFa، pap، aFa، fimH، CrL، iuc، bla، yja و chu به عنوان فاکتور حدت اشریشیا به شمار می روند. هدف از مطالعه حاضر تعیین فیلوژنی جدایه های اشریشیا کلی دخیل در موارد کلی باسیلوز و سلولیت طیور گوشتی در شهربابک (استان کرمان) به روش Multiplex PCR بود. مواد و روش ها: از 117 نمونه اشریشیاکلی (83 نمونه کلی باسیلوزی و34 نمونه سلولیتی) جدا گردید. این نمونه ها به روش های بیوشیمیایی مورد بررسی و تایید قرار گرفتند. یافته ها: جدایه های مربوط به موارد کلی باسیلوز متعلق به گروه های فیلوژنی، گروه A (27/54 درصد)، گروه B1 (22/7درصد)، گروه B2 (03/6 درصد) و گروه D (53/32 درصد) بودند. موارد سلولیت جدا شده متعلق به سه گروه اصلی فیلوژنی A (88/55 درصد)، گروهB1 (88/5 درصد) و گروه D (24/38 درصد) تعلق داشتند. نتیجه گیری: آنالیز آماری ارتباط ویژه ای بین حضور ژن حدت crL و گروه های فیلوژنی A و D را در جدایه های حاصل از کلی باسیلوز نشان داد (05/0>P). نتایج مطالعه نشان داد که جدایه های هر دو بیماری در جوجه های گوشتی می تواند در گروه های فیلوژنی مختلف (به طور عمده A) تقسیم بندی شود. هم چنین پروفایل ژن های حدت در اشریشیاکلی جدا شده از موارد سلولیت با پروفایل موارد کلی باسیلوز در این منطقه کامل متفاوت بود.

سابقه و هدف: کتان نوعی دانه مغذی است که به دلیل داشتن ترکیب هایی چون اسید چرب امگا 3، فیبر رژیمی، پروتئین و لیگنان می تواند سبب جلوگیری از بیماری های قلبی عروقی و سرطان شود. این مطالعه با هدف بررسی تاثیر روش استخراج روغن بر راندمان استخراج و میزان مواد فنلی و آنتی اکسیدان انجام شد. مواد و روش ها: در این پژوهش دو نوع دانه کتان زرد و قهوه ای جهت استخراج روغن با روش پرس سرد و حلال (پترولیوم اتر و اتانول) مورد استفاده قرار گرفت و میزان بازده استخراج و ترکیب های فنولی و آنتی اکسیدانی آن ها، مقایسه گردید. یافته ها: نتایج نشان داد که استخراج روغن با روش پرس سرد از کتان زرد امکان پذیر نبود و فقط کنجاله حاصل شد. بازده استخراج روغن برای کتان زرد و قهوه ای با استفاده از حلال اتانول به ترتیب 55/0± 6/6 و15/1± 3/42 و حلال پترولیوم اتر 98/0± 3/11 و 5/2 ± 03 /63 به دست آمد. ارزیابی ترکیب های فنولی کل و اثر آنتی اکسیدانی روغن های استخراج شده با حلال و پرس سرد نشان داد که مقدار ترکیب های فنولی استخراج شده با روش پرس سرد نسبت به روش حلال، تفاوت معناداری وجود دارد و هم چنین حلال اتانول و پترولیوم اتر نیز تفاوت معناداری در استخراج ترکیب های فنولی دارند. نتیجه گیری: روش استخراج روغن بر میزان روغن استحصال شده بسیار موثر است. مقدار روغن موجود در تخم کتان قهوه ای به طور معنی داری بیش تر از تخم کتان زرد بوده ولی میزان ترکیب های فنولی و آنتی اکسیدانتی آن کم تر از تخم کتان زرد است.

سابقه و هدف: هیالورونیک اسید بیوپلی مری طبیعی و خطی است که به دلیل خصوصیت ویسکوالاستیک، ظرفیت بالای جذب آب و زیست سازگاری کاربردهای وسیعی در پزشکی، دارورسانی و صنایع آرایشی دارد. امروزه تولید صنعتی آن از طریق فرمنتاسیون سویه های استرپتوکوکی است. تحقیق کنونی گزارشی از غربالگری و بهینه سازی شرایط تولید هیالورونیک اسید توسط سویه های استرپتوکوکی بالینی گرو ه های C و G جدا شده از بیماران ایرانی است. مواد و روش ها: یازده سویه استرپتوکوک اکوییسیمیلیس(S. equisimilis) شامل نه سویه گروه C و دو سویه گروه G شناسایی و تولید اولیه هیالورونیک اسید به روش کمپلسومتری با کاربازول تعیین شد و بر اساس نتایج سه سویه با بیش ترین تولید جهت بهینه سازی انتخاب شدند. جهت تعیین pH بهینه، دوازده نقطه در دامنه 1/3-5/7 و غلظت گلوکز در یازده نقطه در دامنه 3/0تا 15 میلی گرم در میلی لیتر و در pH بهینه ارزیابی و بازده هیالورونیک اسید توسط سویه های منتخب تعیین شد. یافته ها: میانگین غلظت هیالورونیک اسید تولید شده در یازده سویه بالینی بین6/216 تا 7/729میکروگرم در میلی لیتر متغیر بود. سه سویه با بیش ترین تولید شامل سویه های GCS-08، GGS-88 و GGS-132و میانگین غلظت هیالورونیک اسید به ترتیب 0/573، 7/579 و 7/729میکروگرم در میلی لیتر جهت مطالعه های بهینه سازی انتخاب شدند. pH بهینه و مقدار هیالورونیک اسید برای هر سویه به ترتیب (5/6 pHو 3/744)GCS-08، (8/4 pH و 9/598) GGS-88 و (8/6 pH و 8/1041) GGS-132بود. کشت در محیط حاوی گلوکز با غلظت 15 میلی گرم در میلی لیتر باعث افزایش تولید هیالورونیک اسید توسط سویه ها به ترتیب 6/1096GCS-08: ، 3/1234 GGS-88: و 6/ 1993GGS-13: میکروگرم در میلی لیتر شد. نتیجه گیری: نتایج نشان دهنده اثر معنی دار pH و رابطه مستقیم غلظت گلوکز بر بازده هیالورونیک اسید است که می تواند باعث افزایش تولید تا 73/2برابر شود. شناسایی سویه تولید کننده در pH اسیدی 8/4 مزیتی برای تولید صنعتی هیالورونیک اسید در شرایط غیر معمول است.

سابقه و هدف: عفونت هلیکوباکترپیلوری از عوامل اصلی ایجاد کننده سرطان معده در انسان است. ژن tagD هلیکوباکترپیلوری که کد کننده آنزیم تیول پروکسیداز است، نقش مهمی در کلونیزه شدن باکتری در جدار معده انسان ایفا می کند. تحقیقات نشان داده است که ژن GPR83 در سرطان معده افزایش بیان دارند و هدف از این تحقیق بررسی میزان بیان ژن GPR83، در سلول های سرطانی آدنوکارسینومای معده (adenocarcinoma gastric cell line[S1] یا (AGS[M2] ترانسفکت شده با وکتور نوترکیب pFLAG-CMV-3-tagD به روش Real Time PCR[M3] است. مواد و روش ها: سلول های AGS به کمک محلول لیپوفکتامین و با پلاسمید حامل ژن کد کننده tagD هلیکوباکتر پیلوری یا پلاسمید خالی (کنترل)، ترانسفکت شدند. سپس استخراج RNA از سلول های کشت داده شده انجام شد و سنتز cDNA صورت پذیرفت و سپس بیان یوکاریوتی ژن tagD[M4] هلیکوباکترپیلوری در سلول های AGS با روش RT-PCR بررسی شد. میزان بیان ژن های GPR83، با روش Real Time PCR ارزیابی گردید. لازم به ذکر است که برای بررسی آپوپتوز از کیت انکسین استفاده شد و در نهایت با استفاده از نرم افزار SPSSو آزمون های آماری t-test Indepent بیان هر یک از ژن ها بررسی شد. یافته ها: یافته های به دست آمده از آنالیز بیان ژن نشان داد که بیان ژن GPR83 در سلول های AGS تیمار شده با tagD نسبت به سلول های کنترل افزایش بیان داشت اما این افزایش بیان از لحاظ آماری معنی دار نبود (P= 0. 0888). نتیجه گیری: به طور کلی، داده های به دست آمده از این تحقیق حاکی از آن بود که بیان ژن GPR83 در سلول های تحت تیمار با ژن tagD هلیکوباکترپیلوری[M5]، تغییر می یابد و به نظر می رسد که ژن GPR83 هلیکوباکترپیلوری در ایجاد این تغییر بیان نقش دارد.

سابقه و هدف: با پیشرفت فناوری نانو و افزایش تقاضا، کاربردهای مختلفی برای نانوذرات به خصوص نانوذرات سیلیس توسعه یافته است. در نتیجه، تلاش برای یافتن منابع جدید برای تولید نانوذرات با حداقل هزینه و مشکلات زیست محیطی همواره وجود دارد. در این پژوهش از گیاه دم اسب (Equisetum telmateia Ehrh. ) که در گروه گیاهانی با مقدار بالای سیلیس بیوژنیکی قرار دارد، به منظور استخراج نانوذرات سیلیس استفاده شده است. مواد و روش ها: به همین منظور، خاکستر به دست آمده از این گیاه پس از فرآیند کلسینه کردن و مراحل متعدد اسیدشویی توسط روش های مختلف مشخصه یابی مورد ارزیابی قرار گرفت. مورفولوژی ذرات سیلیس سنتز شده توسط میکروسکوپ الکترونی روبشی (SEM)، ترکیب شیمیایی و ساختار کریستالی توسط پراش اشعه ایکس (XRD) و فلویورسانس اشعه ایکس (XRF) تعیین گردید. هم چنین، مساحت سطح ویژه ذرات نیز با استفاده از روش BET محاسبه شد. یافته ها: نتایج به دست آمده نشان داد که پودر سیلیس نهایی از خلوص بالا (5/97 درصد)، ساختار آمورف، متوسط اندازه ذرات حدود 30 نانومتر و ساختاری متخلخل با مساحت سطح ویژه حدود /g2m 410 و با قطر حفرات 6/11 نانومتر برخوردار است. نتیجه گیری: بنابراین، خاکستر به دست آمده از گیاه دم اسب را می توان برای تولید نانوذرات سیلیس متخلخل با ویژگی های کاربردی مناسب مورد استفاده قرار داد.

سابقه و هدف: در میان نانوذرات نیمه هادی، نانوذرات دی اکسید تیتانیوم (NPS TiO2) به طور گسترده در صنایع نانوتکنولوژی و پزشکی مورد استفاده قرار گرفته اند. NPS TiO2 از راه های مختلف سنتز می شوند. هدف از این مطالعه بررسی نقش نوع پوشش مورد استفاده در سنتز NPS TiO2 بر ایجاد تغییرهای ساختاری DNA است. مواد و روش ها: از طیف سنجی های جذبی ماوراء بنفش (UV)، فلورسانس و دورنگ نمایی دورانی (CD) به همراه آنالیز پتانسیل زتا جهت بررسی تغییرهای ایجاد شده در ساختار DNA در هنگام افزودن NPS TiO2 حل شده در ماتریکس پراکنده اتیلن گلیکول، حاوی پایدارکننده HNO3 و بدون پوشش استفاده گردید. نتایج: مطالعات طیف سنجی UV، خاموشی فلورسانس و ثابت های اتصال نشان داد نانوذرات حل شده در ماتریکس پراکنده اتیلن گلیکول (M-1 105×2/2) در مقایسه با دو نانوذره دیگر (M-1 104×3/2 برای NPS TiO2 بدون پوشش ویژه و M-1 105×1/1 برای NPS TiO2 حاوی پایدارکننده HNO3)، می توانند برهم کنش قوی تر با DNA داشته باشند و موجب تغییر ساختار DNA شوند. طیف سنجی CD نشان داد در حضور NPS TiO2 استکینگ بازهای DNA کاهش می یابد و مقدار پتانسیل زتا DNA در حضور NPS TiO2 حل شده در ماتریکس پراکنده اتیلن گلیکول کم تر شده است (mV 60/24-). نتیجه گیری: نتایج این مطالعه نشان داد NPS TiO2 حل شده در ماتریکس پراکنده اتیلن گلیکول نسبت به دو نوع نانوذره دیگر برهم کنش قوی تری با DNA دارد. بنابراین نوع پوشش انتخابی در هنگام سنتز NPS TiO2 در میزان برهم کنش نانوذرات با DNA حیاتی است و توجه به این نکته در طراحی نانوداروها و درمان سرطان بسیار مهم است.

سابقه و هدف: لاکتوباسیل ها ارگانیسم هایی گرم مثبت، کاتالاز منفی، بدون اسپور و میله ای شکل هستند. تاکنون بیش از 90 گونه از این باکتری ها شناخته شده است. سوش های متعددی از لاکتوباسیل های پروبیوتیک در طیف وسیعی از محصولات غذایی انسان وجود دارد. شناسایی این باکتری ها در محصولات لبنی سنتی، امکان استفاده از آن ها را در تولید فرآورده های لبنی صنعتی مطبوع تر فراهم می آورد. انتخاب روش های قابل اطمینان، برای شناسایی لاکتوباسیل ها از اهمیت خاصی برخوردار است. روش های بیوشیمیایی وقت گیر و ابهام آمیز هستند. روش های مولکولی، مناسب تر و دقیق تر بوده و می توانند جایگزین روش های قبلی شوند. هدف از این تحقیق، جداسازی لاکتوباسیل ها از فلور موجود در پنیر سنتی شهرستان بندرعباس و شناسایی آن ها با استفاده از روش مولکولی PCR به عنوان یک ابزار موثر در شناسایی سویه های جدا شده است. مواد و روش ها: تعداد50 نمونه پنیر سنتی از شهرستان بندرعباس جمع آوری و سویه های لاکتوباسیل توسط روش های فنوتیپی جدا شدند. برای شناسایی مولکولی آن ها، از پرایمرهای s rRNA16 استفاده گردید. سپس محصول PCR جهت توالی یابی به شرکت پویا ژن گستر ارسال شد. توالی های به دست آمده در بانک ژنی NCBI بلاست شدند. یافته ها: در مجموع 3 سویه لاکتوباسیل شامل لاکتوباسیلوس پلانتاریوم (Lactobacillus plantarum)، لاکتوباسیلوس هلوتیکوس (Lactobacillus helveticus) و لاکتوباسیلوس مورینوس (Lactobacillus murinus) شناسایی شد. نتیجه گیری: این سه سویه کیفیت محصولات لبنی این منطقه را تامین نموده و پتانسیل کاربرد در محصولات تولید شده در صنعت را دارا هستند.

سابقه و هدف: از جمله روش های موثر برای مهندسی پروتئین، به ویژه برای بهبود قابلیت های سویه های صنعتی، روش ژنوم شافلینگ است. این مطالعه منطبق بر تکنیک های مهندسی بیوکاتالیستی و بر اساس روش های DNA شافلینگ انجام شده است. مواد و روش ها: سویه وحشی سودوموناس آیروژینوزا به شماره دسترسی JQ917006. 1 تهیه گردید. سویه های جهش یافته به روش DES و سازگاری با غلظت دیازینون بررسی شدند. پس از آماده سازی پروتوپلاست، برزدن ژنوم انجام شد که از کتابخانه جهش یافته حاصل شده بود. پروتوپلاست های الحاقی از نظر فعالیت بررسی شدند. یافته ها: فعالیت مربوط به سویه های IR1. G1، IR1. D8، IR1. D4 و IR1. D5 به ترتیب عبارتند از 234/0 U/ml، 1/0 U/ml، 098/0 U/ml و 066/0 U/ml و سویه های IRL1. F2 و IRL1. F3 و IRL1. F1 به ترتیب دارای فعالیت mg/L 541/0، mg/L 523/0 و mg/L 509/0 هستند. نتیجه گیری: نتایج حاصل از ارزیابی نسل اول ژنوم شافلینگ (دور اول فیوژن پروتوپلاست) نشان داد که سویه های برخورده (شافل شده) که قادر به رشد در مجاورت توکسین (3000 میلی لیتر در لیتر غلظت دیازینون) بودند، فعالیت بهتری نسبت به سویه های جهش یافته با استفاده از هر دو روش (گرادیان غلظت سم و روش DES) را از خود نشان دادند.