دنیای میکروب ها
سال:1393 | دوره:7 | شماره:2 (پیاپی 19) |تعداد مقالات:10

سابقه و هدف: سل به عنوان دومین علت مرگ و میر ناشی از عفونت شناخته شده است. روش های مولکولی مانند PCR، تکنیک های مناسبی برای شناسایی مایکوباکتریوم توبرکیلوسیس (MTB) هستند. بروز نتایج متفاوت در آزمایشگاه های مختلف، از معایب این تکنیک مولکولی است. این مطالعه با هدف طراحی، ساخت و کاربرد کنترل داخلی در روش PCR به منظور تشخیص MTB انجام شد.مواد و روش ها: به منظور ساخت کنترل داخلی ویژه MTB، ابتدا پرایمرهای ویژه آزمون PCR برای تشخیص مولکولی بهینه و سپس حساسیت و ویژگی آن مشخص گردید. پرایمرهای مرکب (Composite Primer) برای IC-MTB نیز طراحی، تکثیر و سپس کلون شد.IC-MTB تکثیر شده در پلاسمید pTZ57R الحاق و در باکتری اشریشیا کلی JM107 ترانسفورم و کلون گردید. تعداد حداقل IC در هر واکنش PCR از طریق رقیق سازی و همچنین طیف پاسخ PCR همراه با کنترل داخلی مورد بررسی قرار گرفت.یافته ها: اندازه محصول تشخیصی MTB با پرایمرهای اختصاصی آن برابر با 245 جفت باز و محصول IC-MTB برابر با 660 جفت باز بود. که از نظر اندازه، اختلاف مطلوب را با هم دارند. تعداد حداقل IC در هر واکنش 1000 عدد تعیین شد. حداقل و حداکثر حساسیت روش PCR همراه با IC برای DNA باکتری مایکوباکتریوم توبرکیلوسیس بین 10 میلیون تا 10 باکتری محاسبه گردید. در ارزیابی ویژگی با عوامل مختلف نیز هیچ محصول ناخواسته ای مشاهده نشد.نتیجه گیری: استفاده از یک کنترل داخلی در روش PCR می تواند خطاها را در آزمون تشخیص مولکولی مایکوباکتریوم توبرکیلوسیس شناسایی نماید. در واقع تکثیر IC نشان دهنده انجام صحیح تمامی مراحل تکثیر و تشخیص می باشد.

سابقه و هدف: اسینتوباکتر بامانی یکی از علل مهم عفونت های بیمارستانی در سراسر دنیا است. سویه های اسینتوباکتر مقاوم به آنتی بیوتیک ها باعث محدودیت هایی در درمان موثر می شوند. این مطالعه با هدف بررسی جهش در ژن gyrA A جدایه های بالینی اسینتوباکتر بامانی مقاوم به کینولون و ارزیابی الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی آن ها در اصفهان انجام شد.مواد و روش ها: در این مطالعه مقطعی-توصیفی، 70 جدایه اسینتوباکتر از بیماران بستری در ICU بیمارستان الزهرا اصفهان جمع آوری گردید. به منظور شناسایی بیشتر جدایه ها از تست های بیوشیمیایی استاندارد استفاده شد. حساسیت آنتی بیوتیکی با روش انتشار دیسک برای 8 آنتی بیوتیک انجام گرفت. حداقل غلظت باز دارندگی (MIC) سیپروفلوکساسین و لووفلوکساسین با روش E-test برای جدایه ها مطابق با استاندارد CLSI تعیین شد. همچنین به منظور شناسایی جهش در ژن gyrA در جدایه های مقاوم به سیپروفلوکساسین و لووفلوکساسین از روش PCR-RFLP استفاده گردید.یافته ها: جدایه ها بیشترین میزان مقاومت آنتی بیوتیکی را نسبت به سیپروفلوکساسین (100%)، جنتامایسین (100%) و کمترین میزان را نسبت به ایمی پنم (%92.8) و مروپنم (90%) نشان دادند. در روش MIC میزان مقاومت جدایه ها به سیپروفلوکساسین و لووفلوکساسین 100% و %65.7 بود. میزان مقاومت چند دارویی 66.7% درصد و فراوانی جهش ژن gyrA در جدایه ها 93% بود.نتیجه گیری: در این مطالعه مشاهده شد که جدایه های اسینتوباکتر بامانی مقاوم به کینولون دارای جهش در ژن gyrA بودند. این جهش نقش مهمی در افزایش مقاومت در جدایه ها دارد. تشخیص سریع جدایه های اسینتوباکتر بامانی مقاوم به کینولون می تواند کمک مناسبی برای درمان این عفونت ها باشد.

سابقه و هدف: سودوموناس آئروژینوزا از مهمترین علل عفونت های بیمارستانی در بیماران سوختگی می باشد. یکی از مشکلات درمان این بیماران بروز مقاومت های آنتی بیوتیکی با مکانیسم های مختلف می باشد. پمپ های افلاکس mex نقش اساسی در بروز مقاومت چندگانه نسبت به داروهای ضد میکروبی دارند. این مطالعه با هدف ارزیابی شیوع ژن های پمپ های افلاکس mexA-B-oprM و نیز بررسی حضور این ژن ها به صورت فنوتیپی انجام شد.مواد و روش ها: در این مطالعه مقطعی 250 نمونه سواب از زخم بیماران دچار سوختگی سطح 2 و 3 مراجعه کننده به بیمارستان سوختگی قطب الدین شیرازی جمع آوری شد. جدایه های سودوموناس آئروژینوزا با آزمون های بیوشیمیایی و روش PCR تایید گردیدند. الگوی حساسیت دارویی با روش انتشار دیسک، بررسی فنوتیپی فعالیت پمپ های افلاکس با روش کارت ویل و بررسی ژن های mex A و mex B با روش PCR انجام گرفت.یافته ها: در مطالعه حاضر %26.40 (66 مورد) نمونه های زخم بیماران سوختگی آلوده به سودوموناس آئروژینوزا بودند. این باکتری به تمامی آنتی بیوتیک های مورد بررسی به جز کلیسیتین مقاوم بود. 66.66% از جدایه ها (44 مورد) دارای پمپ افلاکس بودند. از این میان 92.42% و 87.87% از جدایه ها به ترتیب دارای ژن های mexA و mexB بودند.نتیجه گیری: نتایج نشان داد که روش ژنوتیپی بسیار دقیق و قابل اعتمادتر از روش فنوتیپی در تشخیص پمپ های افلاکس در جدایه های بالینی سودوموناس آئروژینوزا می باشد. با توجه به حضور بیش از 90% ی ژن های پمپ افلاکس در سودوموناس آئروژینوزا، بررسی حضور این ژن ها در پیشنهاد الگوی درمانی مناسب بیماران آلوده به این باکتری حائز اهمیت است.

سابقه و هدف: پوسیدگی دندان شایع ترین بیماری مزمن در جهان است و استرپتوکوک های گروه میوتانس اصلی ترین عامل ایجاد پوسیدگی در انسان به شمار می روند. استفاده از پروبیوتیک ها یکی از روش های جدید پیشگیری از پوسیدگی دندان می باشد. از جمله پروبیوتیک های مهم در این فرآیند لاکتوباسیلوس رامنوسوس است. این مطالعه با هدف بررسی تاثیر لاکتوباسیلوس رامنوسوس بر فرآیند اتصال استرپتوکوک های دهانی انجام شد.مواد و روش ها: این پژوهش به صورت مقطعی- توصیفی بر روی 40 سویه استرپتوکوک های میوتانس و غیرمیوتانس از نمونه های پلاک و پوسیدگی دندان افراد داوطلب مراجعه کننده به دانشکده دندانپزشکی دانشگاه آزاد اسلامی واحد خوراسگان اصفهان انجام شد. قدرت تشکیل بیوفیلم آن ها ارزیابی و قوی ترین سویه ها در تشکیل بیوفیلم انتخاب شدند. تاثیر لاکتوباسیلوس رامنوسوس (ATCC4769) بر اتصال استرپتوکوک ها به چند روش بررسی گردید. روش 1، مخلوط هم حجم لاکتوباسیل و استرپتوکوک به طور هم زمان، روش 2، 30 دقیقه قبل از ورود استرپتوکوک به سیستم، روش 3، رسوب سلولی پروبیوتیک و در روش 4 روماند کشت شبانه پروبیوتیک استفاده گردید.یافته ها: لاکتوباسیلوس رامنوسوس در هر 4 روش موجب کاهش اتصال استرپتوکوک ها به سطح گردید. از میان روش های مورد بررسی روش 2 از بقیه موثرتر بود. به طوری که در روش 2 کاهش بیشتری در اتصال استرپتوکوک های میوتانس نسبت به غیر میوتانس ایجاد گردید. بین روش های 3 و 4 نیز تفاوتی از نظر اتصال مشاهده نشد. اما تاثیر هر دو روش بر استرپتوکوک های میوتانس از دیگر استرپتوکوک ها بیشتر بود.نتیجه گیری: استفاده از باکتری لاکتوباسیلوس رامنوسوس به عنوان پروبیوتیک اتصال استرپتوکوک های میوتانس و غیرمیوتانس به سطوح را کاهش داده و می تواند منجر به کاهش شیوع پوسیدگی دندان گردد.

سابقه و هدف: آنتی بیوتیک های بتالاکتام در حال حاضر رایج ترین درمان برای عفونت های باکتریایی می باشند. از مهم ترین مکانیسم های مقاومت به این آنتی بیوتیک ها تولید آنزیم های بتالاکتامازی توسط باکتری ها می باشد. هدف از این مطالعه بررسی وجود ژن های بتالاکتامازی ampC و esbl در نمونه های اشریشیا کلی جدا شده از موارد انسانی و طیور می باشد.مواد و روش ها: در این مطالعه مقطعی - توصیفی تعداد 400 نمونه ادرار از مراکز درمانی و 200 نمونه سواب کلواک طیور از مرغداری های استان تهران جمع آوری گردید. شناسایی فنوتیپی سویه های مولد بتا لاکتاماز با استفاده از آزمون حساسیت ضد میکروبی به روش انتشار دیسک انجام شد. به منظور تایید حضور ژن های ampC و esbl در باکتری های مولد آن از روش PCR استفاده گردید.یافته ها: در مجموع 120 نمونه انسانی (30%) و 50 نمونه طیوری (25%) آلوده به باکتری اشریشیاکلی بودند. ارزیابی فنوتیپی نشان داد که 54 مورد (45%) از نمونه های انسانی تولید کننده آنزیم بتا لاکتامازی نوع ESBLs و 2 مورد (1.67%) تولید کننده AmpC بودند. در نمونه های طیوری در 3 مورد (21.4%) وجود آنزیم بتا لاکتامازی نوع ESBLs تایید شد. این نمونه ها فاقد ژن ampC بودند. بررسی های ژنوتیپی نشان داد که 2 (1.67%) نمونه انسانی واجد ژن های بتالاکتامازی نوع ampC بودند.نتیجه گیری: نتایج به دست آمده در این مطالعه نشان می دهد که ژن بتالاکتامازی ampC در نمونه های انسانی وجود داشته اما در نمونه های طیوری باید مطالعات دقیق تری صورت پذیرد. به دلیل اهمیت ارگانیسم های تولیدکننده این آنزیم ها در ایجاد عفونت های بیمارستانی و برای جلوگیری از گسترش آن ها توصیه می شود تحقیقات وسیع تری از نظر بررسی شیوع واقعی این آنزیم در ایران انجام شود.

سابقه و هدف: آلودگی های نفتی، یکی از مشکلات عمده تهدید کننده محیط زیست به شمار می روند. امروزه روش تجزیه زیستی با استفاده از باکتری های بومی تجزیه کننده هیدروکربن به دلیل مناسب بودن از لحاظ اقتصادی و زیست محیطی مورد توجه می باشد. آلکانی ورراکس به عنوان یک باکتری تجزیه کننده هیدروکربن در محیط های دریایی آلوده به نفت خام شناخته شده است. این مطالعه با هدف بررسی توانایی تجزیه زیستی نفت خام توسط آلکانی ورراکس دیزلولی، جداسازی شده از رسوبات منطقه ساحلی خلیج فارس انجام شد.مواد و روش ها: در این مطالعه بنیادی کاربردی، ابتدا عمل جداسازی و غنی سازی باکتری تجزیه کننده نفت از رسوبات منطقه ساحلی خلیج فارس انجام گرفت. باکتری جداسازی شده، با روش شناسایی مولکولی مبتنی بر توالی 16S rRNA شناسایی گردید. توانایی تجزیه زیستی سویه جداسازی شده، در غلظت های مختلف نفت خام مورد بررسی قرار گرفت.یافته ها: با استفاده از روش شناسایی مولکولی باکتری جداسازی شده به عنوان آلکانی ورراکس دیزلولی شناسایی گردید. این باکتری در مدت زمان کمتر از 1 دقیقه به صورت پایدار قادر به متلاشی کردن قطرات نفت بود. نتایج نشان داد که در غلظت 1، 2.5 و 5 درصدی نفت خام، میزان تجزیه زیستی به ترتیب 68.37، 67.97 و 13.2 درصد می باشد.نتیجه گیری: از آنجایی که جنس آلکانی ورراکس، یک باکتری بومی محیط های دریایی آلوده به هیدروکربن می باشد و توانایی آن در تجزیه زیستی نفت خام ثابت شده است، استفاده از این باکتری برای رفع آلودگی های نفتی پیشنهاد می گردد.

سابقه و هدف: کرم گلوگاه انار، لارو شب پره اکتومیلویس سراتونیا می باشد که از مهم ترین آفات انار محسوب می گردد. در حال حاضر هر گونه عملیات سم پاشی بر علیه این آفت فاقد نتیجه بود است. یکی از روش های کنترل استفاده از عوامل بیولوژیک مانند ایجاد تغییرات تولید مثلی توسط باکتری ولباکیا است. این مطالعه با هدف ردیابی باکتری همزیست ولباکیا در کرم گلوگاه انار و تعیین جایگاه تاکسونومیکی آن در استان فارس انجام شد.مواد و روش ها: در این پژوهش به صورت تصادفی 100 نمونه از انارهای آلوده مناطق مختلف استان فارس جمع آوری گردید. پس از استخراج DNA از تخمدان حشره، به منظور ردیابی و وجود باکتری همزیست ولباکیا از روش PCR استفاده شد. پس از تعیین توالی قطعه حاصل و مقایسه آن با توالی های موجود در بانک ژن جهانی، جایگاه تاکسونومیکی ولباکیا با استفاده از نرم افزارهای ClustalX و TreeView تعیین گردید.یافته ها: در این مطالعه تنها یک جمعیت از شیراز آلودگی به ولباکیا را نشان داد. پس از تکثیر ژن wsp، محصول یک قطعه 513 جفت بازی بود که به دنبال تعیین توالی با شماره دسترسی KF007903 در بانک جهانی ژن ثبت گردید. با مقایسه توالی به دست آمده و توالی موجود در بانک ژنی مشخص گردید که این باکتری در زیر گروه Fur8 از گروه B متعلق به ولباکیا پیپینتیس قرار دارد.نتیجه گیری: مطالعه حاضر اولین گزارش وجود ولباکیا در کرم گلوگاه انار در ایران و جهان می باشد. از آنجایی که نمونه برداری در فاصله زمانی تیر تا شهریور ماه انجام پذیرفته است، بنابراین شیوع کم باکتری ولباکیا در مناطق مورد بررسی را می توان به احتمال اثر دما به عنوان یک عامل بازدارنده رشد باکتری در حشرات نسبت داد.

سابقه و هدف: با توجه به سیال پذیری مورفولوژیک سیانوباکتری ها در شرایط مختلف، لازم است برای شناسایی آن ها علاوه بر مطالعات ریخت شناسی مطالعاتی در زمینه فیتوشیمی، فیزیولوژی، زیست شناسی مولکولی و ژنتیک نیز انجام گیرد. این مطالعه برای اولین بار در ایران با هدف شناسایی مولکولی سیانوباکتری لپتولینگبیا اس پی. و بررسی پاسخ های مورفولوژیک آن نسبت به پرتوهای مونوکروماتیک قرمز، سبز و آبی انجام شد.مواد و روش ها: به منظور بررسی پاسخ های مورفولوژیک لپتولینگبیا اس پی. ابتدا نمونه خالص در محیط کشت مایع BG11 در شرایط اتوتروف (نور سفید)، و سپس تحت تاثیر پرتوهای مونوکروماتیک قرمز، سبز و آبی قرار گرفت. از ابتدا تا پایان تیماردهی نوع اجتماعات، سیالیت فیلامنت، بیومتری، وضعیت تریکوم، وضعیت سلول ها و تغییرات ساختاری آن ها با استفاده از میکروسکوپ نوری و الکترونی نگاره (SEM)، در مقاطع زمانی ماهیانه، هفتگی و روزانه مورد بررسی قرار گرفت.یافته ها: مطالعات ساختاری و بیومتری انجام شده توسط میکروسکوپ الکترونی نگاره و نوری، حاکی از این است که سیانوباکتری مورد نظر تحت تاثیر عوامل محیطی مختلف شکل ظاهری و میزان رشد سلول های خود را تغییر داده و در نور سبز و قرمز نسبت به نور آبی سازش بهتری از خود نشان می دهد. لپتولینگبیا اس پی. در نور سبز و قرمز سلول هایی با اشکال متمایز و دارای دیواره قرمز رنگ تولید می نماید که این تاییدی بر تنوع پذیری مورفولوژیک این گونه می باشند.نتیجه گیری: سیانوباکتری لپتولینگبیا اس پی. دارای سیالیت مورفولوژیک بوده و در شرایط نور مونوکروماتیک رفتارهای متفاوتی از خود نشان می دهد.