پژوهش های آسیب شناسی زیستی
سال:1387 | دوره:11 | شماره:3-4 |تعداد مقالات:12

هدف: با توجه به اهمیت مولکول های اینتگرین در لانه گزینی و عدم اطلاعات کافی در الگوی بیان این مولکول ها در مراحل مختلف چرخه استروس بررسی این مولکول ها در اندومتر موش طی مراحل مختلف چرخه استروس ضروری به نظر می رسد. مواد و روش ها: حیوانات مورد مطالعه در این تحقیق موش های بالغ نژاد NMRI تعداد 15 سر با سن 6-8 هفته بودند. ابتدا مراحل مختلف چرخه استروس پرواستروس، استروس، مت استروس و دی استروس از طریق بررسی سلول شناسی اسمیر واژینال تعیین شد. موش ها به تعداد حداقل سه راس در هر مرحله با جا به جایی مهره های گردنی کشته شده و نمونه بافتی 3/1 میانی هر یک از شاخ های رحمی در هر مرحله تهیه شد، سپس نمونه ها به دستگاه کرایواستات منتقل شده و برش هایی به ضخامت 8-10 میکرون از آن ها تهیه شد. این لام ها برای مطالعات ایمونوهیستوشیمی و ارزیابی بروز اینتگرین های a4، b1، av، b3 و لیگاند آن ها استئوپونتین به کار گرفته شدند. نتایج: مطابق یافته ها بیان مولکول های اینتگرین در اندومتر موش تنها در مرحله مت استروس مثبت بود و در مکان های متفاوتی از اندومتر بیان شد. اینتگرین  avتنها در پوشش غددی و اینتگرین b3 فقط در غشای قاعده ای هر دو نوع پوشش خود را نشان داد در حالی که بیان a4 برای هر دو نوع پوشش و هر دو غشا مثبت بود. b1 تنها اینتگرینی بود که بیان آن هم در پوشش سطحی و غددی و هم در استروما ملاحظه شد. استئوپونتین فقط در غشای راسی هر دو پوشش دیده شد و در نقاط دیگر اندومتر دیده نشد. نتیجه گیری: به نظر می رسد که ظهور اینتگرین ها در اندومتر بر اساس اهمیت و اولویت نقش آن در پدیده لانه گزینی باشد، بنابراین مولکول های a4، b1 و استئوپونتین که در پوشش سطحی بیان می شوند، می توانند در اتصال و چسبندگی سلول به سلول و اینتگرین های av، b3 و b1 که در پوشش غددی و استروما بیان می شوند، می توانند در گسترش و نفوذ جنین مداخله کنند.

هدف: میدان های مغناطیسی از پدیده هایی است که امروزه همه جا در محیط پیرامون ما یافت می شود. سیم های فشار قوی، دستگاه های الکتریکی که در خانه ها و محیط کار فراوان یافت می شوند، وسایل ترابری مانند قطارهای شهری و همچنین دستگاه های گوناگون تشخیصی و درمانی همچون MRI زاینده میدان های مغناطیسی پیرامون ما هستند. میدان های مغناطیسی می توانند اثرهای گوناگونی بر جانداران از سطح سلول تا پیکره گیاهان، جانوران و آدمی بگذارند. در بررسی های اپیدمیولوژیک اثر این میدان ها در بالا رفتن میزان بروز برخی از سرطان ها همچون سرطان خون به خوبی نشان داده شده است. در آزمایش های گوناگون دانشمندان کوشیده اند تا به ساز و کار این اثرهای زیستی پی ببرند؛ اما داده های به دست آمده بسیار ناهماهنگ و گستره انجام این بررسی ها چه از دیدگاه فیزیکی (بزرگی میدان، بسامد، زمان میدان دهی و...) و چه از دیدگاه زیستی (گونه یاخته، میزان تمایز و...) پراکنده است. گرچه این پژوهش ها در یاخته های کشت شده در بیرون از بدن جاندار به انجام رسیده است، می تواند شاهدی بر فرایندهای طبیعی یاخته در بدن نیز باشد. در این تحقیق هدف دستیابی به نتایجی است که بر پایه آن ها بتوان به درک بهتری از ساز و کار تاثیر میدان بر جانداران در سطح سلولی دست یافت. مواد و روش ها: در این بررسی، اثرهای زیستی میدان مغناطیسی ایستای 15 میلی تسلایی روی یاخته های بنیادی استرومایی مغز استخوان موش صحرایی سنجیده شد. برای این کار روش فلوسایتومتری با فلوروکروم پروپیدیوم یدید به کار گرفته شد که با تشخیص محتوای DNA یاخته ها معیاری برای پی بردن به مرحله ای که سلول در آن به سر می برد را به دست می دهد. میدان مغناطیسی به کار گرفته شده حاصل از عبور جریان 12 آمپری از سیم پیچ ها با بزرگی 15 میلی تسلا اعمال شد. نتایج: با آنالیز چرخه یاخته ای دگرگونی هایی در مراحل گوناگون چرخه یاخته ای دیده شد؛ به گونه ای که شمار یاخته هایی که در مرحله G0/G1 بودند افزایش معنی داری نشان داد. این افزایش شمار یاخته ای به دلیل افزایش در طول مرحله G0/G1 چرخه بوده است. همچنین این اثر در یاخته هایی که پیش از تیمار مغناطیسی در معرض پراکسید هیدروژن که از دسته مواد شیمیایی اکسنده است، قرار گرفته بودند اثر مشابهی را نشان داد. در مرحله S از چرخه نیز در شمار یاخته های دو گروه از تیمار کاهش مشاهده شد. نتیجه گیری: این پدیده می تواند در اثر آسیب ماده ژنتیکی یاخته یا اختلال در کارکرد پروتئین های چرخه یاخته ای باشد که که هر دو فرایند می تواند آغازی بر ناهنجاری در فرایندهای طبیعی یاخته باشد. از آن جا که انرژی اینمیدان ها در حدی نیست که بتواند به طور مستقیم بر مولکول ها اثر گذار باشد، فرایندهای غیرمستقیم با واسطه های رادیکالی محتمل ترین مکانیسم به شمار می آید.

هدف: لیشمانیوزیس جزء بیماری های عفونی – انگلی مهم دنیاست که توسط تک یاخته های نسجی خونی داخل سلولی اجباری از جنس لیشمانیا ایجاد می شود. ژن LACK یک پروتئین 36 کیلودالتونی است که در فرم های پروماستیگوت و آماستیگوت انگل، در گونه های مختلف لیشمانیا به مقدار بالایی وجود دارد.LACK  پاسخ ایمنی سریعی علیه انگل ایجاد می کند؛ بنابراین این ژن برای تهیه آنتی ژن نوترکیب مناسب بوده و انتخاب خوبی به عنوان واکسن DNA علیه لیشمانیا ماژور است، این مطالعه با هدف کلون نمودن ژن LACK لیشمانیا ماژور ایران برای تولید پروتئین نوترکیب برای ساخت واکسن انجام شده است. مواد و روش ها: در این تحقیق DNA از سویه استاندارد ایرانی لیشمانیا ماژور (MRHO/IR/75/ER) استخراج و ژنLACK  با استفاده از روش PCR تکثیر شد. سپس قطعه 939 جفت بازی تکثیر شده در پلاسمید pTZ57R/T کلون شد. پلاسمید نوترکیب در باکتری اشرشیاکلی سویه TG1 ترانسفورم و توالی یابی شد. نتایج: آنالیز تعیین توالی ژن LACK لیشمانیا ماژور کلون شده در پلاسمید pTZ57R/T مشخص کرد که قطعه ای 939 جفت بازی در این پلاسمید کلون شده است و ژن کلون شده، ژن LACK لیشمانیا ماژور است. این سویه ایرانی 89 درصد با سویه موجود در بانک ژنی با کد LmjF28.2740 شباهت دارد. این کلونینگ با روش های PCR و برش آنزیمی تایید شد. نتیجه گیری: نتایج به دست آمده نشان داد که این ژن با موفقیت تکثیر و کلون شده و از این کلون می توان کلون هایی در پلاسمید بیانی پروکاریوتی برای تهیه آنتی ژن نوترکیب و پلاسمید یوکاریوتی برای تهیه واکسن DNA استفاده کرد. این مطالعه راهی برای پیشرفت تولید پلاسمیدهای نوترکیب برای مطالعات آینده است.

هدف: آلفا - تالاسمی یکی از شایع ترین اختلالات هموگلوبین در جهان محسوب می شود و در اکثر موارد در نتیجه ایجاد حذف در یک یا هر دو ژن آلفا - گلوبین اتفاق می افتد. حذف های شناخته شده آلفا - گلوبین مانند حذف های 3.7، 4.2، 20.5 کیلوبازی و Med را می توان با روش PCR چندگانه تشخیص داد. با این وجود تعدادی از حذف های ناشناخته در این ژن وجود دارند که با استفاده از روش هایی مانند روش فوق و همچنین روش تعیین توالی قابل تشخیص نخواهند بود. در این تحقیق از روش Real-time PCR به منظور تشخیص وجود یا عدم وجود حذف های ناشناخته استفاده شده است. مواد و روش ها: روش Real-time PCR مبتنی بر استفاده از رنگ سایبرگرین I به منظور تکثیر ژن های a1، a2 و همچنین ژن مرجع CLCN7 انجام پذیرفت و آنالیز داده ها با استفاده از روش مقایسه ای چرخه آستانه برای تعیین میزان ژنی انجام شد. نتایج: نتایج به دست آمده با استفاده از روش مقایسه ای چرخه آستانه نسبت 0.90±0.16 را برای افراد نرمال و نسبت 0.32±0.15 را برای افراد ناقل حذف هتروزیگوت در ژن های a1 و  a2گلوبین نشان می دهد. همچنین آنالیز منحنی ذوب اختصاصیت تکثیر ژن های مورد نظر را تایید کرد. نتیجه گیری: روش Real-time PCR روشی ساده، سریع و مطمئن بوده و می توان از آن برای شناسایی حذف های ناشناخته در ناقلین آلفا - تالاسمی استفاده نمود.

هدف: مقاومت دارویی پلاسمودیوم فالسی پاروم نسبت به کلروکین مشکل اصلی در مناطق مالاریاخیز است. وجود ارتباط بین چندشکلی های تک نوکلئوتیدی در ژن های pfcrt و pfmdr1 پلاسمودیوم فالسی پاروم با مقاومت نسبت به کلروکین شناخته شده است. در این مطالعه پنج چندشکلی تک نوکلئوتیدی در ژن pfmdr1 و یک چندشکلی تک نوکلئوتیدی در ژن pfcrt با استفاده از روش Real-Time PCR بررسی شد. مواد و روش ها: بدین منظور 26 نمونه خون از افراد آلوده به پلاسمودیوم فالسی پاروم و مقاوم به کلروکین از بندر چابهار در استان سیستان و بلوچستان جمع آوری شد. این جهش ها با استفاده از روش Light CyclerTM و پروب های دورگه سازی شناسایی شدند. نتایج: طبق نتایج این مطالعه در کدون 86 ژن pfmdr1 تعداد 6 نمونه (23 درصد) از مجموع 26 نمونه مورد مطالعه جهش مشاهده شد. گرچه این جهش در سال اول مطالعه، دیده نشد ولی در سال دوم قابل ملاحظه بود. جهشK76T  ژن pfcrt در کدون CVMNT ژن pfcrt در (42.3 درصد) 11 نمونه ها و در کدون های CVIET در 7 (26.9 درصد) نمونه ها،SVIET  تنها در دو نمونه (7.6 درصد) و SVMNT در 5 نمونه (19.2 درصد) مشاهده شد. نتیجه گیری: جهش در طول دو سال مطالعه افزایش یافته است. نتایج مطالعه نشان داد که چندشکلی نوکلئوتیدی مربوط به ژن های pfcrt و pfmdr1 در منطقه وجود دارد که این موضوع می تواند به عنوان نشانگری برای کنترل مالاریا در چابهار مدنظر باشد.

هدف: پروتئین CREB یک فاکتور مهم پایین دست بسیاری از مسیرهای علامتی به شمار می رود. با طراحی siRNA کارامد برای ژن CREB می توان مسیرهای علامتی بسیاری از داروها را در سلول های مختلف به ویژه سلول K562 بررسی نمود. در این تحقیق میزان مهار بیان ژن CREB با به کارگیری دو siRNA مختلف برای این ژن بررسی شد. مواد و روش ها: طراحی siRNA بر اساس معیار Reynolds انجام گرفت. سلول های K562 با روش لیپوفکشن با siRNA ها ترانسفکت شدند. بررسی اثر مهاری بیان ژن CREB با استفاده از Real-time PCR کمی - نسبی انجام گرفت. نتایج: طبق نتایج به دست آمده یکی از siRNA ها اثر مهاری بالایی بر روی بیان CREB در سلول های K562 نشان داد، و بیان ژن CREB، تا 87 درصد در سلول های K562 کاهش یافت. نتیجه گیری: نتایج حاصل از Real-time PCR نشان داد که از دو siRNA به کار رفته در سلول های K562 برای مهار ژن CREB1، فقط یکی از آن ها قدرت مهاری با کارایی بالا را دارد. با توجه به این که هر دو siRNA مطابق با معیارهای Reynolds است، احتمالا عوامل دیگری هم در موثر بودن siRNA دخالت دارند. برای مهار کارامد یک ژن با siRNA بایستی بیش از یک siRNA برای قسمت های مختلف آن طراحی و آزمایش شود.

هدف: ویروس های هرپس سیمپلکس، عامل عفونت های انسانی مسوول تولید عفونت های ماندگار و نهفته، در سراسر جهان محسوب می شوند. عفونت های ویروس هرپس سیمپلکس اغلب به صورت مستمر در جمعیت نرمال عود مکرر دارند اما در افراد با نقص سیستم ایمنی مشکلاتی را ایجاد می کند. مواد و روش ها: در این تحقیق ابتدا ویروس های هرپس سیمپلکس درسلول های BK تکثیر یافت و عیار آنتی بادی ها علیه ویروس هرپس سیمپلکس در 502 نمونه جمع آوری شده با آزمون خنثی سازی ویروس به عنوان استاندارد طلایی و الایزای طراحی شده تعیین شد. نتایج: بر اساس نتایج به دست آمده به ترتیب 80.48 و 81.67 درصد عیار بیش از 1.8 در آزمون خنثی سازی ویروس و الایزا داشتند ضریب پیرسون بین متغیرهای مورد بررسی 0.96 محاسبه شد که نشان دهنده ارتباط معنی دار و نزدیک بین متغیرهای مورد بررسی فوق می باشد (ضریب پیرسون0.96=). نتیجه گیری: اطلاعات به دست آمده نشان داد که آزمون الایزای طراحی شده می تواند برای غربالگری و بررسی شیوع آنتی بادی های ضد هرپس سیمپلکس نوع 1 استفاده شود که به نوبه خود در سازماندهی بیماران خاص برای درمان با به کارگیری روش های آزمایشگاهی کم هزینه و مناسب موثر است.

هدف: لیمنه پالوستریس حلزون آب شیرین است که در گزارش های علمی از استان مازندران به ثبت رسیده است. این حلزون می تواند میزبان واسط برخی ترماتودهای انگلی حیوانی باشد که گاه در انسان نیز دیده می شود. گزارش هایی در دست است که این حلزون می تواند میزبان واسط فاسیولا هپاتیکا نیز باشد. از آن جا که گزارشی از کم و کیف آلودگی و اکولوژی حلزون های فوق در استان مازندران در دست نیست، این بررسی به منظور بازنگری و مطابقت مطالعات قبلی صورت گرفت. مواد و روش ها: در این مطالعه توصیفی بیش از 181 نقطه استان مازندران بررسی شد. در 36 مورد که دارای شرایط لازم برای جمع آوری حلزون دانسته شد، 490 حلزون لیمنه پالوستریس جمع آوری شد. در آزمایشگاه پس از تشخیص نوع حلزون، با استفاده از روش له کردن حلزون ها، اشکال احتمالی انگلی موجود در آن با لوپ حشره شناسی بررسی شد سپس اطلاعات حاصل همراه با برخی اطلاعات اکولوژی منطقه در نرم افزارهای Microsoft Office و سیستم اطلاعات جغرافیایی مشتمل بر نرم افزار ArcGIS مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفته و به رشته تحریر درآمد. نتایج: از 490 حلزون لیمنه پالوستریس صید شده، 6 مورد (1.22 درصد) آلودگی به اکینوستوماسرکریا دیده شد. دمای مناسب زیست حلزون حدود 15 تا 19 درجه سلسیوس بوده و میزان املاح آب کلونی های این حلزون نیز حدود 200 تا 400 قسمت در میلیون بوده است. جمعیت کلونی های حلزون در فصول پاییز و زمستان افزایش یافته اما آلودگی حلزون در تابستان مشاهده شده است. نتیجه گیری: این تحقیق توانست شرایط اقلیمی مورد نیاز حلزون، پراکندگی، پایش جمعیت حلزون را روشن کند. همچنین میزبان واسط برخی اکینوستوم های پرندگان (اردک های) محلی را که تاکنون چندان مورد بررسی قرار نگرفته بود را نشان دهد. چنین به نظر می رسد که برای تاسیس مزارع پرورش اردک و بوقلمون، الگوی اکولوژیک ساده ای که ارایه شد می تواند مفید باشد.

هدف: توکسوپلاسما گونده ای تک یاخته ای داخل سلولی و عامل ایجاد توکسوپلاسموزیس بوده و دارای انتشار جهانی است. در سال های اخیر پیشرفت هایی در زمینه تهیه واکسن صورت گرفته که منجر به ایجاد پاسخ های محافظت کننده شده است. آنتی ژن GRA7 با وزن مولکولی 29 کیلودالتون یک آنتی ژن ترشحی گرانولی فشرده است که به وسیله سلول های آلوده میزبان آزاد می شود. در سلول های آلوده به تاکی زوئیت، پروتئین 29 کیلو دالتونی در واکوئل پارازیتوفروز تجمع پیدا می کند. علاوه بر ایمونوژن بودن و کاندیدای تهیه واکسن در تشخیص نیز به کار می رود. مواد و روش ها: برای این کار ابتدا DNA توکسوپلاسما گونده ای با روش فنل کلروفرم استخراج شده سپس با استفاده از آغازگرهای اختصاصی ژن GRA7 این قطعه با استفاده PCR تکثیر و در ناقل TOPO کلون شد. پلاسمید کلون شده در باکتری TOP10 ترانسفورم شد. با استفاده از PCR، هضم آنزیمی و توالی یابی کلون مورد نظر تایید شد. نتایج: تعیین توالی ژن GRA7 کلون شده در پلاسمید TOPO نشان داد که قطعه ای 749 جفت بازی در این پلاسمید کلون شده است و با سویه RH موجود در بانک ژنی از نظر توالی نوکلئوتیدی فقط در یک باز تفاوت داشت. نتیجه گیری: نتایج به دست آمده نشان می دهد که کلون به دست آمده برای ساب کلون کردن در پلاسمیدهای بیانی یوکاریوتی و پروکاریوتی مناسب است.

هدف: عفونت نهفته هپاتیت B یک فرم بالینی از بیماری هپاتیت B است که در آن فرد با وجود این که از نظر HBsAg منفی است اما دارای HBV-DNA در خون محیطی است. این فرم از بیماری مشکلات عدیده ای را در انتقال خون به وجود خواهد آورد. هدف از انجام این تحقیق بررسی وضعیت عفونت نهفته هپاتیت B در میان اهداکنندگان خون رفسنجان است. مواد و روش ها: در این مطالعه مقطعی توصیفی تعداد 3700 نمونه پلاسما از انتقال خون رفسنجان جمع آوری شد و به وسیله آزمایش ELISA از نظر HBsAg و anti-HBc مورد ارزشیابی قرار گرفتند. به منظور به دست آوردن موارد عفونت نهفته هپاتیت B تمام نمونه های HBsAg منفی و anti-HBc مثبت از نظر وجود HBV-DNA با روش واکنش تکثیر زنجیره ای (PCR) بررسی شدند. نتایج: نتایج این تحقیق روی نمونه های HBsAg منفی نشان داد که 352 نمونه (9.51 درصد) از این نمونه ها از نظر anti-HBc مثبت هستند. با بررسی این نمونه های HBsAg منفی و anti-HBc ثبت از نظر HBV-DNA با آزمایش PCR، مشخص شد که 57 (16.1 درصد از افراد anti-HBc مثبت و HBsAg منفی و حدود 1.54 درصد از کل نمونه ها) نمونه HBV-DNA مثبت بودند. نتیجه گیری: این نتایج با بررسی های قبلی محققان حاضر روی اهداکنندگان خون مطابقت دارد و آن ها را تایید می کند. بنابراین به نظر می رسد که شیوع این فرم از عفونت هپاتیت B در بین اهداکنندگان خون بالا است و باید بررسی بیشتری در ارتباط با امکان احتمال هپاتیت B بعد از تزریق خون و فراورده های خونی از این طریق به عمل آید.

هدف: سلول های دندریتیک نقش کلیدی در آغاز و جهت دهی پاسخ های ایمنی دارند. با مشاهده نقص این سلول ها در افراد مبتلا به تومور، توجه زیادی به اصلاح این سلول ها و استفاده از آن ها در ایمنی درمانی سرطان جلب شده است. در مطالعه قبلی محققان حاضر نشان دادند که لیزات لیستریا مونوسیتوژنز قادر به بالغ کردن سلول های دندریتیک، القای پاسخ لنفوسیتی نوع 1 (TH1) و افزایش بقا در یک مدل تجربی می شود. در تحقیق حاضر هدف بررسی تاثیر اجزای مختلف لیستریا مونوسیتوژنز در افزایش کارایی سلول های دندریتیک برای ایجاد پاسخ TH1 است. مواد و روش ها: مراحل کار شامل تهیه اجزای مختلف لیستریا مونوسیتوژنز (لیزات لیستریا، اجزای پروتئینی و اسید نوکلئیک (DNA)، بالغ کردن سلول های دندریتیک مشتق شده از مغز استخوان با انواع اجزای لیستریا مونوسیتوژنز، ارزیابی سیتوکین های مترشحه از سلول های دندریتیک و سلول های بود. نتایج: نتایج به دست آمده بیانگر آن است که کلیه اجزای لیستریا (لیزات، پروتئین و اسید نوکلئیک) قادر به بالغ کردن سلول های دندریتیک مجاور شده با آنتی ژن فیبروسارکومای موش بوده و موجب جهت دهی پاسخ به سمت TH1 می شوند. با این وجود سلول های دندریتیک بالغ شده با اجزای پروتئینی لیستریا مونوسیتوژنز به طور موثرتری قادر به جهت دهی پاسخ به سمت TH1 هستند. نتیجه گیری: نتایج ما نشان داده که سلول های دندریتیک بالغ شده با اجزای لیستریا به طور موثرتری موجب القای پاسخ لنفوسیتی نوع 1 می شود و ممکن است در ایمنی درمانی سرطان موثر باشد.