Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

مقاله مقاله نشریه

مشخصات مقاله

مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

نسخه انگلیسی

Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

video

Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

sound

Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

نسخه انگلیسی

Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

بازدید:

753
Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

دانلود:

444
Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

استناد:

اطلاعات مقاله نشریه

عنوان

تولید متالوپروتئنیاز 63 کیلودالتونی (gp63) لیشمانیاماژور در مخمر متیلوتروف Picha pastoris

صفحات

 صفحه شروع 69 | صفحه پایان 82

چکیده

 سابقه و هدف: با توجه به مشکلات  ناشی از لیشمانیا به عنوان به عنوان یک انگل داخل سلولی بیماریزا که بیش از 12 میلیون نفر را در بیش از 86 کشور جهان مبتلا نموده است و در راستای ارزیابی توانایی گیلکوپروتئین 63 کیلودالتونی(gp63) لیشمانیا ماژور به عنوان یک ایمنوژن در تحریک سیستم ایمنی میزبان و همچنین انتی ژن تشخیصی ,ژن کد کننده مولکول فوق در وکتور دو میزبانه PHIL-S1 به منظور بیان آن ژن در مخمر متیلوتروف P.pastoris کلون و بیان گردید و در نهایت خصوصیات مولکول نوترکیب حاصل نیز مورد ارزیابی قرار گرفت .مواد و روش ها: ژن تغییر یافته gp63 به گونه ای که فقط پروتئین بالغ راکد نماید , در وکتور دو میزبانه (وهمچنین پلاسمید puc19) کلون گردید .مخمر Pichia pastoris  (سویه های KM71,GS115) با پلاسمید دو میزبانه نوترکیب و همچنین با پلاسمید Phil-S1 (به تنهایی) ترانسفورم گردید. کلون های ترانسفورم شده در محیط فاقد هیستیدین انتخاب شدند, DNA کروموزومی ترانسفورمنت ها تخلیص گردید و با روش های PCRو (S.B.) Blotting Sourthn, وارد شدن ژن فوق در کرموزوم مخمر نوترکیب مخمر نو ترکیب مورد ارزیابی قرار گرفت . ترانسفورمنت های تایید شده, در محیط حاوی گلیسرول BMGY تا حصول کدورت OD600=6 کشت و سپس جهت بیان ژن هترولوگ فوق به محیط متانول, BMMY انتقال داده شدند . با افزودن متانول به صورت روزانه, حالت القا در آنان حفظ گردید . با تلخیص RNA و انجام (N.B) Northen Blotting صحت نسخه برداری و همچنین بیان ژن فوق (تولید پروتئین نوترکیب) با ژل 12% وسترن بلاتینگ و IFA مورد ارزیابی قرار گرفت . میکروسکوپ الکترونی میکروسکپی برای تعیین محل داخل سلولی گیلکوپروتئین هترولوگ rgp63 در مخمر بیان کننده ژن فوق مورد استفاده قرار گرفتند . فعالیت متالوپروتئیناز نوترکیب (rgp63) و همچنین تاثیر بازدارنده هایی آنزیمی با SDS-PAGE gelatin gel  مطالعه گردید . توانایی مخمر در گیلکوزیلاسیون متالوپروتئیناز نوترکیب (rgp63) نیز سنجش گردید .یافته ها:PCR و(S.B)وارد شدن ژن rgp63 را به گونه ای صحیح در کرموزوم مخمر نو ترکیب تایید کردند. (N.B.) بر روی RNA تخلیص شده از مخمر نوترکیب صحت نسخه برداری از ژن gp63, ژل %12SDS-PAGE  و وسترن بلاتینگ نیز, بیان ژن فوق (تولید پروتیین نوترکیب) را در مخمر ترانسفورمنت تایید نمودند. مطالعه با  SDS-PAGE gelatin gel, فعال بودن مولکول فوق را اثبات نمود. یدواستامید و EDTA  با غلظت 5 میلی مولار از فعالیت این مولکول در ژل مزبور ممانعت نمودند. بررسی ها با میکروسکوپ الکترونی وجود ناحیه پروتیینی متراکم را در فضای پریپلاسمی مخمر ترانسفورم شده با پلاسمید حاوی ژن نشان داد. بررسی های ایمونوالکترون میکروسکوپی IFA نیز تایید نمودند که ناحیه پروتیینی فوق , همان پروتئین نوترکیب (rgp63) می باشد. آزمون PNGase-F نیز گلیکوزیله بودن باندهای بیش از 53 کیلو دالتونی آن را اثبات نمود.نتیجه گیری: گلیکوپروتئین 63 کیلودالتونی تولید شده در مخمر به فرم طبیعی خود بیشتر شباهت دارد, زیرا علاوه بر گلیکوزیله بودن در SDS-PAGE gelatin gel نیز فعال می باشند.  

استنادها

  • ثبت نشده است.
  • ارجاعات

  • ثبت نشده است.
  • استناددهی

    APA: کپی

    شعبانی، علی اکبر، مک مستر، روبرت، کاظمی، بهرام، شهباززاده، دلاور، مهبودی، فریدون، و کریمی، محسن. (1380). تولید متالوپروتئنیاز 63 کیلودالتونی (gp63) لیشمانیاماژور در مخمر متیلوتروف Picha pastoris. کومش، 3(2-1)، 69-82. SID. https://sid.ir/paper/37449/fa

    Vancouver: کپی

    شعبانی علی اکبر، مک مستر روبرت، کاظمی بهرام، شهباززاده دلاور، مهبودی فریدون، کریمی محسن. تولید متالوپروتئنیاز 63 کیلودالتونی (gp63) لیشمانیاماژور در مخمر متیلوتروف Picha pastoris. کومش[Internet]. 1380؛3(2-1):69-82. Available from: https://sid.ir/paper/37449/fa

    IEEE: کپی

    علی اکبر شعبانی، روبرت مک مستر، بهرام کاظمی، دلاور شهباززاده، فریدون مهبودی، و محسن کریمی، “تولید متالوپروتئنیاز 63 کیلودالتونی (gp63) لیشمانیاماژور در مخمر متیلوتروف Picha pastoris،” کومش، vol. 3، no. 2-1، pp. 69–82، 1380، [Online]. Available: https://sid.ir/paper/37449/fa

    مقالات مرتبط نشریه ای

    مقالات مرتبط همایشی

  • ثبت نشده است.
  • طرح های مرتبط

  • ثبت نشده است.
  • کارگاه های پیشنهادی






    بازگشت به بالا