زعفران به عنوان گیاهی چندساله و تری پلوئید به دلیل داشتن متابولیت های ثانویه ارزشمند، یکی از مهم ترین گیاهان دارویی دنیا محسوب می شود. مطالعه ی حاضر با هدف ارزیابی عوامل مختلف (نوع اکسین، امواج فراصوت، دما، نور و کیتوسان) بر کالوس زایی و رشد کالوس در ریزنمونه های بنه زعفران در قالب دو آزمایش انجام شد. در آزمایش اول تأثیر امواج فراصوت و نوع اکسین مورد بررسی قرار گرفت. بدین منظور بنه های زعفران پس از ضدعفونی به قسمت های مساوی تقسیم و پس از تیمار با امواج فراصوت، روی محیط کشت MS حاوی mg. l-1 2 اکسین (NAA و 2, 4-D) به همراه mg. l-1 2Kin کشت شدند. در آزمایش دوم، تأثیر درجه حرارت، کیتوسان و روشنایی بطورجداگانه بر کالوس زایی و رشد کالوس مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج تجزیه واریانس نشان داد که بین تیمارها از نظر درصد کالوس زایی و وزن تر کالوس در ماه دوم و سوم پس از کشت تفاوت معنی داری وجود دارد. محیط کشت MS حاوی0. 5 mg. l-1 Kin + 2 mg. l-1 NAA از نظر درصد کالوس زایی و رشد کالوس ریزنمونه های بنه زعفران در مقایسه با محیط کشت MS حاوی 0. 5 mg. l-1 Kin + 2 mg. l-1 2, 4-D از کارایی بالاتری برخوردار بود. در محیط کشت MS حاوی 2, 4-D که درصد کالوس زایی و رشد کالوس پایین بود، استفاده از تیمار زخم زنی با استفاده از تیمار امواج فراصوت باعث تقویت رشد کالوس گردید. در آزمایش دوم نیز درصد کالوس زایی و رشد ریزنمونه ها در محیط کشت حاوی NAA بطور معنی داری بیشتر از 2, 4-Dبود. علاوه براین در آزمایش دوم، در محیط کشت MS حاوی 2, 4-D استفاده از کیتوسان با غلظت g. l-1 25/0 باعث تحریک القای کالوس گردید و فراوانی کالوس زایی ریزنمونه های بنه زعفران در این محیط کشت را افزایش داد، ولی افزایش غلظت کیتوسان از g. l-125/0 بهg. l-1 75/0 کالوس زایی و رشد کالوس را کاهش داد. در حالی که در محیط کشتMS حاوی NAA که از کارایی کالوس زایی و رشد کالوس بالایی برخوردار بود، استفاده از استفاده از کیتوسان، کالوس زایی و رشد کالوس بنه زعفران را کاهش داده است. بطورکلی، بیشترین درصد کالوس زایی در محیط کشت MS حاوی NAA در دمای º C 25 و تاریکی بدست آمد که برای مطالعات کشت درون شیشه ایی و مهندسی ژنتیک زعفران قابل توصیه است.