هدف: فاکتور محرکه کلنی گرانولوسیت انسانی یکی از فاکتورهای رشد خونساز است که تکثیر و تمایز سلولهای پیش ساز گرانولوسیت نوتروفیلی سلولهای مغز استخوان را تحریک می کند. این فاکتور همچنین تمایز نهایی بعضی از سلولهای لوسمی میلوییدی را القا می کند. hG-CSF در منوسیتها و ماکروفاژهای انسانی در پاسخ به آندوتوکسین باکتریایی و همچنین رده های سلولی انسانی نظیر کارسینومای حفره دهانی CHU-2 و کارسینومای مثانه 5637 تولید می شود. هدف این پژوهش، استخراج RNA کل از سلولهای تحریک شده منوسیت انسانی، سنتز cDNA دو رشته ای hG-CSF و در نهایت کلون کردن cDNA سنتز شده در یک ناقل کلونینگ مناسب بود.مواد و روشها: در ابتدا، سلولهای منوسیت از خون محیطی فرد طبیعی جداسازی شد. این سلولها کشت داده شد و به طور همزمان به وسیله محرکهای لیپوپلی ساکارید باکتریایی (LPS) و اینترفرون گامای انسانی (hIFN-γ) تحریک شد. RNA کل، از سلولها استخراج شد و به دنبال آن هر دو cDNA دارای ترادف راهنما (کد کننده پروتئین اولیه) و فاقد ترادف راهنما (کد کننده پروتئین بالغ) با استفاده از پرایمرهای اختصاصی و بر اساس روش RT-PCR سنتز شد. همچنین هر دو cDNA مذکور به طور همزمان از RNA کل استخراج شده از سلولهای کارسینومای مثانه انسانی 5637 سنتز شد. در مرحله بعد هر دو cDNA با استفاده از آنزیم محدودگر StyI که بر روی ژل الکتروفورز تشکیل سه قطعه مجزا می دهد، مورد تایید قرار گرفت، سپس cDNA دارای ترادف راهنمای مشتق از منوسیتها درون ناقل کلونینگ pBluescriptIISK داخل و در باکتری اشریشیاکلی (سویه TOP10F') کلون شد.نتایج و بحث: به دنبال غربالگری، کلنیهای صحیح انتخاب شد و ناقل نوترکیب از باکتریهای تراریخته، استخراج و با استفاده از آنزیمهای محدودگر BamHI, EcoRI, StyI, NcoI تایید شد. برای تایید نهایی، ناقل نوترکیب صحیح انتخاب و قطعه کلون شده، تعیین توالی شد. بعد از تایید ترادف نوکلئوتیدی قطعه کلون شده؛ با استفاده از پرایمرهای اختصاصی، ناقل نوترکیب به عنوان الگو و با کمک PCR، cDNA فاقد ترادف راهنما سنتز و در ناقل کلونینگ داخل و در باکتری TOP10F' کلون شد. در نهایت کلون صحیح انتخاب شد و با استفاده از آنزیمهای محدودگر مورد تایید قرار گرفت.