آرشیو رازی
سال:1391 | دوره:67 | شماره:2 |تعداد مقالات:16

هوتنتوتا یکی از متنوع ترین جنس های خانواده بوتیده است که گونه های آن دارای گسترش جهانی بوده و از نقاط مختلف آفریقا و آسیا گزارش شده است. به تازگی کوواریک (2007) این عقرب را در نقاط مختلف دنیا مورد مطالعه مجدد قرار داده و 29 گروه گونه ای را در زیر مجموعه این جنس گزارش نموده است. عقرب هوتنتوتا یکی از شش عقرب مهم از نظر پزشکی در ایران می باشد که تقریبا در تمام نقاط کشور گسترش دارد. در این مقاله با ذکر ویژگی های ریخت شناسی و ریخت سنجی شش گونه عقرب هوتنتوتا در کشور به ذکر راه های تشخیصی این عقرب پرداخته می شود.

طی سالهای 1390-1389، از روشReal-time PCR برای ردیابی RNA ویروس تب برفکی در 147 نمونه اپیتلیوم از دام های مشکوک به بیماری تب برفکی که از کانون های مختلف اخذ گردیده بود استفاده شد. قطعه 3 D ژن ویروس تب برفکی به عنوان ناحیه ژنومی حفاظت شده در سروتیپهای ویروس توسطReal-time PCR مورد آزمایش قرار گرفت. رد یابی ویروس تب برفکی در روشReal-time PCR حساسیت بیشتری نسبت به روش RT-PCR معمولی و سایر روش های تشخیصی روتین دارد. برای ارزیابی حساسیت این روش از رقت های لگاریتمی RNA ویروس تب برفکی (Asia) استفاده شد که با رقت سازی log -10 RNA ویروس تب برفکی سویه Asia مقدار TCID50/ml101.2 بدست آمد. برای ارزیابی اختصاصیت جفت پرایمر مربوط به قطعه 3D ژن ویروس تب برفکی و همچنین پروب مربوطه از دو ایزوله ویروس زبان آبی (blue-tongue) و ویروس وزیکولار خوک (Swine vesicular disease virus) استفاده شد. در نهایت نتایج نشان داد که به نظر می رسدReal-time PCR یک ابزار قوی و مناسب تشخیصی بوده که می توان در کنار دیگر روشهای روتین تشخیصی ویروس تب برفکی بکار گرفته شود.

درک ساختار ژنتیکی و تنوع ژنتیکی فاسیولاهپاتیکای جدا شده از میزبان های مختلف، پیچیدگی های همه گیری شناسی و مهمی دارد که در کنترل فاسیولوزیس موثر هستند. از روش RAPD-PCR جهت مطالعه تنوع ژنتیکی فاسیولاهپاتیکا در گوسفند و گاو بکار گرفته شد. DNA از کرم های بالغ فاسیولا جمع آوری شده که از کبد حیوانات آلوده در کشتارگاه استان آذربایجان شرقی در شمال غرب ایران استخراج گردید. سپس با استفاده ازسه عدد پرایمر اولیگونوکلئوتید دکامری همراه با توالی های DNA خالص به وسیله واکنش زنجیره ای پلی مراز تکثیر شدند.الگوهای RAPD بصورت اختصاصی اما برای هر قطعه DNA در هر پرایمر متفاوت بودند. شباهت داخل گونه ای برای دو ایزوله فاسیولاهپاتیکا در محدوده 69 تا 100 درصد قرار داشت. یافته ها نشان داد که فاصله ژنتیکی بین گونه ای بیشتر از فاصله ژنتیکی داخل گونه ای است (47-19 درصد در مقایسه با 19-0 درصد). درخت تبار زایشی پیشنهادی درباره این ایزوله ها نشان داد که تنوع ژنتیکی در تحت ساختارهای جمعیتی فاسیولاهپاتیکای انگل گوسفند و گاو در ایران، سوالات بحث برانگیزی درباره اختصاصات میزبان، اپیدمیولوژی (از قبیل، انتقال زئونوتیک) و اکولوژی را بدنبال دارد. علاوه براین روش RAPD-PCR در تشخیص انفرادی و بررسیهای اپیدمیولوژیکی در مناطق آندمیک مفید است.

زهر عقربهای خانواده بوتیده بعنوان اینکه حاوی پروتئین آلفا تک رشته ای با خاصیت بازی که حاوی حدود 70-60 اسید آمینه است و بوسیله 4 پل دای سولفیدی محکم شده است، شناخته می شود. مجموع کل RNA از غده زهر عقرب مزوبوتوس اپئوس صید شده از استان خوزستان ایران خالص سازی گردید. با استفاده از این RNA بعنوان رونوشت، و پرایمر الیگو (dT) اصلاح شده cDNA ساخته شد. با استفاده از پرایمرهای همولوگ و بکار گیری تکنیک Semi-nested RT-PCR، یک قطعه cDNA با اندازه 273 نوکلئوتید تکثیر شد که متعاقبا تعیین توالی گردید. این قطعه cDNA حاوی ناحیه کد شونده ای بود که آن ناحیه پپتیدی با 85 اسید آمینه را کد می نمود که وزن ملکولی آن 9.337 کیلو دالتون و نقطه ایزو الکتریک آن 6.52 محاسبه گردید. نام این پپتید MeNaTx a- 4 قرار داده شد. این پپتید با مشابهتی که با دامین مربوط به «توکسین های عقرب با زنجیره بلند» نشان می داد، جز سوپر فامیلی توکسین-3 قرار گرفت. همترازی اسید آمینه ای MeNaTx a- 4 نشان داد که این پپتید 95% مشابهت با توکسین آلفا- 3 مهار کننده کانالهای سدیمی مربوط به عقرب مزوبوتوس اپئوس آسیایی دارد.

فلج اطفال به عنوان یک بیماری عفونی ویروسی حاد که به وسیله ویروس پولیو ایجاد می شود، همچنان در کشورهای در حال پیشرفت وجود دارد. علیرغم تلاش جهانی برای ریشه کنی این بیماری، ادامه ایمن سازی با یک واکسن کارا و مطمئن ضروری است. برای تعیین توانمندی واکسن توسعه یک روش معتبر به همراه یک کشت سلول حساس الزامی است. دراین مطالعه پس از طراحی آزمایش Potency واکسن به روش میکرو، سه نوع کشت سلول لاین، Hela، Hep2C و Vero با دو روش میکرو و ماکرو مورد ارزیابی و مقایسه قرار گرفتند. در طراحی آزمایش 5 فاکتور تاثیر گذار شامل، ویروس، سلول، سرم، محیط نگهدارنده و میزان Co2 در 6 مرحله مورد مطالعه قرار گرفتند. سرانجام بهترین شرایط انجام آزمایش Potency در قالب دو روش پیشنهاد شد. برای معتبر سازی آزمایش شاخصهای معتبر سازی در حضور فراورده استاندارد کاری (WRP) اعتبار سنجی شدند. آنالیزهای آماری به وسیله آنالیز واریانس و مقایسه های چند گانه توسط LSD و Tokey HSD نشان داد که تفاوت Potency بین سری های مختلف واکسن و همچنین بین روش ماکرو و روش میکرو معنی دار نیست، افزایش شماره پاساژ سلولها باعث کاهش حساسیت سلولها و کاهش میزان Potency واکسن تحت آزمایش می شود و تفاوت بین حساسیت سلولهای تحت آزمایش نسبت به ویروس واکسینال فلج اطفال معنی دار است بطوری که سلول Hela دارای بیشترین حساسیت و سلول Vero دارای کمترین حساسیت است.

کلستریدیوم پرفرینجنس عامل مهم بیماریزایی روده ای درانسان و حیوانات می باشد. این باکتری توکسین های زیادی را ترشح می نماید که نقش کلیدی در پاتوژنز بیماری داشته و بر اساس اختلاف در ترشح توکسین های آلفا، بتا، اپسیلون و یوتا به پنج تیپ توکسینی تقسیم می شود. در این مطالعه روش واکنش زنجیره ای پلیمراز برای شناسایی ژن cpb2 به منظور تعیین جدایه های حاوی توکسین بتا- 2 در بین تایپ های مختلف کلستریدیوم پرفرینجنس که از موارد بیماری های آنتریک حیوانات اهلی در ایران جدا شده اند بکارگرفته شد. نتایج نشان داد که ژن cpb2 در جدایه های کلستریدیوم پرفرینجنس تایپ های A، B، C و D به ترتیب با فراوانی 54.5%، 62%، 42.8% و 69.2% حضور دارد. در مجموع 34 از 59 جدایه (56.7%) کلستریدیوم پرفرینجنس از نظر ژن بتا- 2 مثبت شناخته شدند. این مطالعه اولین گزارش از حضور ژن cpb2 در کلستریدیوم پرفرینجنس جدا شده از موارد آنتریک حیوانات اهلی در ایران می باشد. مطالعات تکمیلی در خصوص نقش دقیق توکسین بتا- 2 در پاتوژنز باکتری پیشنهاد می گردد.

کزاز بیماری مهمی است که توسط سم تتانواسپاسمین کلستریدیوم تتانی ایجاد می گردد. در این مطالعه ما شش عامل مهم شامل OD، pH، MLD، KF، LF و پروتئین تام، سه سویه واکسینال، هاروارد 52، جی 5 و 49205 کلستریدیوم تتانی را مورد مقایسه قرار دادیم تا مشخص شود کدامیک برای استفاده در تولید واکسن مناسب هستند. سه سویه مذکور، در محیط تایوگلیکولات تجدید حیات شدند و سپس 2 میلی لیتر از این محیط به هرکدام از شانزده ارلن 500 میلی لیتری حاوی محیط مولر- میلر برای انجام فرمانتاسیون تلقیح گردید. تعداد 7، 6 و 3 ظرف به ترتیب برای هاروارد 52، جی 5 و 49205 اختصاص داده شده بود. در مدت هفت روز آزمایش، چندین آزمون برای ارزیابی شش عامل مذکور بر روی نمونه های تهیه شده از محیطهای کشت، انجام گرفت. نتایج آزمایش نشان داد که سویه هاروارد 52 در چهار تا از مجموع شش فاکتور مورد بررسی اختلاف معنی داری با دو سویه هاروارد جی 5 و 49205 دارد، به طوریکه مقادیر LF و OD آن ضعیف تر (به ترتیب در حد 0.001 و 0.01) و MLD و pH آن بهتر (به ترتیب در حد 0.05 و 0.02) از دو سویه دیگر بود. نتیجه آنکه، با توجه به اطلاعات بدست آمده از سه سویه واکسینال، به نظر می رسد دو سویه جی 5 و 49205 توکسین زایی بیشتری از سویه هاروارد 52 دارند و لذا با انجام یک رشته کارهای تکمیلی احتمالا از دو سویه مذکور بتوان مشابه سویه هاروارد 52 به طور روزمره برای تولید واکسن کزاز استفاده کرد.

در سال های اخیر نانوپارتیکل های کایتوزان بطور وسیعی بعنوان سیستم انتقال داروهای پروتئینی مورد مطالعه قرار گرفته اند. هدف از این مطالعه انجام تحقیقات جامع بمنظور تهیه نانوپارتیکل های زیست سازگار و زیست تخریب پذیر و بارگیری زهر عقرب گادیم (همی اسکورپیوس لپتوروس) و ارزیابی قابلیت سیستم مذکور برای آنتی ژن رسانی بوده است. در این تحقیق از روش ژلاسیون یونی کایتوزان و تری پلی فسفات برای تهیه نانوپارتیکل های کایتوزان بهره برده شده و عوامل موثر در این فرآیند مورد ارزیابی قرار گرفته و خصوصیات فیزیکوشیمیایی و الگوی آزادسازی سم از نانوپارتیکل ها بررسی شده اند. مطالعات ظرفیت احتباس و بازده انکپسولاسیون بهینه را در غلظت 2mg/ml پلیمر و 500mg/ml زهر عقرب نشان دادند. اندازه نانوذرات در شرایط بهینه درحدود 160-130 نانومتر (polydispersity index values of 0.423) بوده و ذرات دارای زتا پتانسیل مثبت بوده اند. در بررسی میکروسکوپ الکترونی عبوری سطوح نانوذرات بهینه بدست آمده را کاملا صاف و شکل آنها کروی بوده است. بررسی کینتیک آزادسازی سم از نانوپارتیکل ها نشان داد که 50 درصد سم در 4 ساعت اول و باقیمانده بطور آهسته طی یک روند طولانی مدت آزاد می گردند. نتایج بیانگر این امر بوده است که نانوذرات تهیه شده در این مطالعه احتمالا دارای قابلیت استفاده برای انتقال آنتی ژن می باشند.

هدف از این تحقیق تولید و شناسایی آنزیم آلفا آمیلاز از باکتری باسیل لیچنیفورمیس بود. این باکتری در محیط کشت مایع رشد داده شد. بهترین شرایط برای تولید آمیلاز به دست آمد که شامل دمای 37 درجه سانتی گراد، دوران انکوباسیون 120 ساعت و pH 7 بود. آلفا آمیلاز به دست آمده توسط ستون کروماتوگرافی تعویض یونی و ژل فیلتراسیون G100 با 19.1 برابر افزایش داد. فعالیت اختصاصی آنزیم در مقایسه با آنزیم موجود در محیط کشت معادل 929.47 واحد بر میلیگرم پروتئین به دست آمد. آلفا آمیلاز به دست آمده دارای حداکثر فعالیت در pH.7 و دمای 65 درجه سانتی گراد بود. وزن مولکولی آلفا آمیلاز به دست آمده بر اساس ژل الکتروفورز معادل 72 کیلو دالتون به دست آمد.

توکسوپلاسما گوندئی، تک یاخته ای است که انسان و تقریبا همه حیوانات خون گرم آلوده می کند. چرخه زندگی انگل شامل یک سیکل تولید مثل غیر جنسی در میزبان های واسط (پستانداران و پرندگان) و یک سیکل تولید مثل جنسی در میزبان های نهایی (گربه سانان) می باشد. گربه ها، هم میزبان نهایی و هم میزبان واسط این تک یاخته هستند. هدف از این مطالعه، بررسی حضور پادتن های ایجاد شده در گربه ها، متعاقب عفونت با سویه Rh توکسوپلاسما گوندئی با استفاده از روش ایمنوبلات و بررسی کارایی روش ایمنوبلات طراحی شده با استفاده از آنتی ژن خالص سطحی (SAG1) حاصل از تکی زوآیت این تک یاخته در تشخیص بیماری بود. به این منظور، اقدام به ایجاد عفونت تجربی در گربه های سرم منفی، با استفاده از تزریق داخل صفاقی تکی زوآیت های تکثیر شده در محیط کشت سلول های Vero گردید. پس از آن، اقدام به ردیابی حضور پادتن های IgG با دو روش ایمنوبلات و تست پادتن درخشان غیر مستقیم گردید. در ایمنوبلات انجام شده با آنتی ژن خالص سطحی، خطوط مثبت در منطقه مربوط به پروتئین های 30 کیلو دالتونی در فاصله زمانی هشت روز پس از عفونت دیده شدند. خطوط مثبت در گروه کنترل که از محیط کشت حاوی Vero Cell های بدون تک یاخته دریافت کرده بودند دیده نشد. نتایج مثبت و منفی، با نتایج تست استاندارد IFAT در توافق کامل بودند. نتایج این بررسی نشان داد که ایمنوبلات طراحی شده بر مبنای یا آنتی ژن خالص سطحی، تست تشخیصی مناسبی جهت تشخیص سرولوژیک پادتن های ضد T. gondii در گربه هایی که به تازگی با این تک یاخته آلوده شده اند می باشد.

هدف از این مطالعه، بررسی امکان استفاده از سوربیتول، سوکروز و ژلاتین همراه با گلیسرول بمنظور انجماد سلول های آلوده به شیزونت تیلریا آنولاتا بود. تاثیر روش انجماد با ارزیابی میزان درصد زنده ماندن سلول ها و رشد آنها در محیط کشت مناسب، مقایسه و اندازه گیری شد. نتیجه چنین بود که روش متداول مورد استفاده در تولید واکسن تیلریوز گاوی با استفاده از 5 درصد سرم تاثیر داده شده با PEG و 10 درصد گلیسرول نتایجی مانند روش استاندارد که با استفاده از 80 درصد سرم جنین گوساله و 10 درصد گلیسرول می باشد قابل مقایسه بود. نتیجه جالب در میان 13 ترکیب پیشنهادی عاری از سرم، مربوط به ترکیب سوربیتول (0.2m) و گلیسرول (10%) بود که میزان زنده ماندن سلول ها 54 درصد پس از یک سال با نتایج رشد مطلوب ارزیابی شد. بنابراین می توان نتیجه گرفت که روش مرسوم مورد استفاده در تولید واکسن، هنوز بهترین روش در نگهداری سلول های لاین واکسن تیلریا در تولید واکسن تیلریوز گاوی می باشد.

«اپولیس» یکی از نئوپلاسم های خوش خیم حفره دهانی می باشد که از رباط پیرامون دندانی و یا بافت پیوندی منشاء گرفته و در سگ بسیار شایع و در گربه بندرت دیده می شود. ولی میزان بروز این تومور در اسب بسیار نادر است. اندازه این تومور می تواند بقدری بزرگ باشد که مانع از عمل جویدن مواد غذایی بشود. از نظر خصوصیات بافتی اپولیس در سگ به چندین فرم طبقه بندی می شود. اپولیس فیبروماتوس (در دید میکروسکوپیک) با دارا بودن بافت زمینه ای سفت و پر عروقی که در آن توده های سلول های فیبروبلاست ستاره ای شکل که توسط مقادیرمتغیری از الیاف فشرده کلاژن محاصره گریده اند، مشخص می شود. گزارش حاضر مربوط به یک راس نریان 16 ساله می باشد که چندین سال برای تولید سرم ضد مارگزیدگی بکار گرفته می شد. این حیوان بعلت بروز علائم دشواری در جویدن و بلع مواد غذایی معاینه گردید. بررسی دقیق دهان حیوان نشان داد که یک توده بزرگ (15×12 سانتی متری) بر روی لثه در سمت راست فک پائینی وجود دارد. هیچ شانسی برای بهبودی حیوان متصور نبود. بنابراین حیوان به روش انسانی کشته و سپس کالبد گشایی بر روی آن انجام گردید. بر اساس محل بروز تومور وهمچنین مشخصات ماکروسکوپیک و میکروسکوپیک، توده مشاهده شده تحت عنوان اپولیس فیبروماتوس شناسایی و تقسیم بندی گردید.