تازه های بیوتکنولوژی سلولی مولکولی
سال:1392 | دوره:3 | شماره:11 |تعداد مقالات:13

سابقه و هدف: آنزیم آسپاراژیناز نقش مهمی در درمان لوسمی لنفوبلاستی حاد ایفا می کند. این آنزیم به دلیل دارا بودن خاصیت آنتی نئوپلاستیک، در فرایند شیمی درمانی حائز اهمیت می باشد. هدف این تحقیق، جستجو و معرفی آنزیم های ال آسپاراژیناز خارج سلولی تولید شده توسط جنس باسیلوس می باشد که بطور بالقوه می توانند خصوصیات سرولوژیک مطلوب تر و عوارض جانبی کمتری نسبت به انواع تجاری رایج داشته باشند.مواد و روش ها: گونه های باسیلوس جدا شده از خاک های غنی از پروتئین، در محیط کشت M9 تغییر یافته کشت داده شدند. کلنی های تولید کننده آنزیم مورد نظر، بر اساس تغییر رنگ محیط متمایز گردیدند. سپس آنزیم تولید شده، خالص سازی گشته و میزان فعالیت آن مورد بررسی قرار گرفت. همچنین وزن مولکولی آنزیم اندازه گیری شد. باسیلوس های تولید کننده آنزیم دارای فعالیت مطلوب، با روش مولکولی مورد شناسایی قرار گرفتند.یافته ها: سویه های جدید باسیلوس تولید کننده آنزیم ال-آسپاراژیناز شناسایی گشته و خصوصیات کلی آنزیم های استخراجی مطالعه گردید.نتیجه گیری: از آنجا که ال-آسپاراژیناز جدا شده از باکتری های مختلف دارای اثرات ضد سرطانی متفاوتی بوده است، جستجو برای یافتن میکروارگانیسم های تولید کننده این آنزیم، یکی از راه های اصلی جهت دستیابی به آنزیمی با خصوصیات درمانی ایده آل می باشد.

سابقه و هدف: ژن Wdhn13 کد کننده پروتئین های گروه  LEA 2 می باشد. پروتئین های LEA اولین بار در گندم و پنبه به عنوان پروتئین های تجمعی در اواخر دوره جنینی شناسایی و مطرح شدند. ساختار اولیه پروتئین های LEA شامل دمین های اولیه باردار و بدون بار از آمینواسیدهای قطبی باقی مانده اما غیرآبدوست می باشد، که دلالت برآبدوست بودن پروتئین های LEA دارد.مواد و روشها: در این تحقیق روابط فیلوژنتیکی و بیوانفورماتیکی ژن Wdhn13 در 8 گونه گندم مطالعه شد و جهت آنالیزهای مولکولی 3 آنزیم برشی HindIII با سایت برش ALBI ,aagctt با سایت برشی agct و TaqI با سایت برشی tcga استفاده شد و توسط نرم افزار بیولوژیکی CLC به صورت Insilco و در شرایط خارج آزمایشگاهی به توالی ها اعمال شد.یافته ها: نتایج حاصل از آنالیزهای فیلوژنتیکی بر اساس الگوریتم UPGMA نشان دهنده این موضوع بود که گندم های مورد بررسی از لحاظ این ژن در 3 گروه قرار دارند. که گروه اول شامل 4 رقم گندم نان (توالی موجود در NCBI) گندم سرداری، گندم دوروم شوش و گندم دوروم بروجرد، گروه دوم شامل 1 رقم وحشی اورارتو و گروه سوم شامل 2 رقم نان گنبد و دیکوکوئیدز بودند.نتیجه گیری: نتایج این تحقیق نمایانگر ارتباط ویژه و نزدیکی بعضی گونه های مورد مطالعه بود.

سابقه و هدف: در بین عوامل ویروسی متعددی که باعث بروز علایم موزاییک و ایجاد خسارت در گیاه لوبیا چیتی  (Phaseolus vulgaris L.) میشوند، دو ویروس موزای یک معمولی لوبیا BCMV و و ویروس موزاییک نکروتیک لوبیا BCMV اهمیت ویژه ای دارند. به منظور ردیابی این دو ویروس و تعیین برخی خصوصیات سرولوژیک و مولکولی آنها، در یک فصل زراعی نمونه هایی با علایم موزاییک، رگبرگ روشنی، برگشتگی، نکروتیک برگ و ساقه لوبیا جمع آوری گردید.مواد و روش ها: به منظور ردیابی این دو ویروسدر ابتدا نمونه ها با روش های سرولوژیک DAS-ELISA و لکه گذاری بافتی (Tissue-blot) با آنتی سرم های چند همسانه ای اختصاصی مورد سنجش و ردیابی قرار گرفتند. سپس جهت تایید و بررسی دقیق تر، نمونه های انتخابی آلوده در الایزا با آزمون IC-RT-PCR مورد ارزیابی قرار گرفتند.یافته ها: cDNA بدست آمده در دستگاه ترموسایکلر تکثیر گردید. محصول حاصل در ژل آگاروز الکتروفورز شد. باند حاصل به اندازه تقریبی 373 باز و 683 باز از سکانس منطقه ای از ژن پروتئین پوششی ویروس مورد نظر به ترتیب برای ویروس موزاییک معمولی و ویروس موزاییک نکروتیک معمولی لوبیا مشاهده گردید. با بکارگیری تکنیک IC-RT-PCR بر اساس مقایسه سایز باندهای ایجاد شده در این روش، دو ویروس مذکور ازگیاهان لوبیای آلوده مناطق اراک، نیشابور، زنجان و کرج شناسایی و تفکیک گردید.نتیجه گیری: ویروس موزاییک معمولی و موزاییک نکروتیک معمولی لوبیا بطور گسترده ای در اغلب مناطق کشت و کار لوبیا در ایران پراکنده هستند. و در بعضی اوقات نیز به طور مشترک و تواما گیاه لوبیا را آلوده میسازند. نشان داده شده که تکنیک IC-RT-PCR برای شناسایی و تشخیص این دو ویروس از حساسیت بالایی نسبت به روش الایزا بر خوردار است. در این تکنیک بکارگیری همزمان و مخلوطی از آنتی سرم اختصاصی ویروس و پرایمرهای مربوطه باعث شناسایی و تفکیک همزمان دو ویروس در صورت آلودگی توام خواهد شد.

سابقه و هدف: بیماری انسداد مزمن ریوی ( (COPDاز التهاب و تخریب بخش هایی از بافت ریه به وجود می آید و معمولا افراد را در سنین بالای 50 سال مبتلا می نماید. با توجه به اینکه مشکل اصلی این بیماران ضعف در انجام کارهای فیزیکی به دلیل بروز تنگی نفس و کمبود انرژی است این سوال مطرح می شود که آیا تغیییرات در آنزیم سیتوکروم اکسیداز (COX) به عنوان آخرین و مهمترین جز زنجیره تنفسی می تواند در بروز این بیماری دخیل باشد. در همین راستا 65 بیمار COPD با میانگین سنی 8 ± 71 و 50 فرد سالم با میانگین سنی 56±4 انتخاب شده و از DNA تخلیص شده از نمونه خون آنها برای انجام این تحقیق استفاده شد.مواد و روش ها: DNA های جدا شده برای تکثیر زیرواحد یک میتوکندریایی آنزیم COX مورد استفاده قرار گرفت. در این تحقیق غربالگری 4 پلی مرفیسم با استفاده از روش جدید ARMS Real time PCR در قطعه COXI انجام شد.یافته ها: بعد از انجام PCR، نتایج بدست آمده در دو گروه بیمار و سالم جهت تعیین درصد پلی مرفیسم در آنها مورد بررسی قرار گرفتند. نتایج نشان دهنده اختلاف قابل ملاحظه میزان پلی مرفیسم ها بین دو گروه مبتلا به COPD و گروه سالم بود.نتیجه گیری: بیشترین اختلاف میزان پلی مرفیسم در دو گروه بیمار و سالم در نوکلوتید 6060 بود که تنها پلی مرفیسم منجر به تغییر اسید آمینه است. افزایش مقدار این پلی مرفیسم ها در افراد مبتلا به COPD نسبت به افراد نرمال میتواند این پلی مرفیسم ها را به عنوان یکی از عوامل دخیل در ابتلا به COPD معرفی کند.

زمینه و هدف: آترواسکلروزیس و بیماری های ناشی از کلسیفیکاسیون عروقی یکی از علل عمده مرگ و میر در بیماران با آرتریت روماتوئید (RA) می باشد. هر چند مطالعات متعددی دراین خصوص صورت گرفته اما نتایج زیادی در مورد اثرات این فاکتورها بروی بیومارکرهای استخوان و ارتباط آنها با کلسیفیکاسیون عروقی در دسترس نیست. هدف از این مطالعه مقایسه سطوح سرمی ماتریکس Gla پروتئین (MGP) و استئوپروتگرین (OPG) و ارتباط آنها با شدت فعالیت بیمار (DASA28) در زنان مبتلا به آرتریت روماتوئید می باشد.مواد و روش ها: 45 بیمار زن، مبتلا به آرتریت روماتوئید و نیز 45 زن سالم که از نظر سن و جنس با بیماران همسان بودند بعنوان گروه کنترل انتخاب شدند. مقادیر سرمی ماتریکس Gla پروتئین (MGP) واستئوپروتگرین (OPG) به روش الایزا و مقادیر سرمی پروتئین فاز حاد با حساسیت بال (hs-CRP) نیز به روش توربیدومتری اندازه گیری شد.یافته ها: نتایج حاکی از افزایش معنی داری در سطح سرمی OPG و hs-CRP در گروه بیماران نسبت به گروه کنترل می باشد. تفاوت معنی داری در مقدار سطح سرمی MGP بیماران نسبت به گروه کنترل مشاهده نشد. همبستگی مثبت معنی داری بین hs-CRP و مقادیر سرعت رسوب گلبولهای قرمز (ESR) و نیز همبستگی مثبت معنی داری بین hs-CRP و مقادیر درجه فعالیت بیماری (DAS28) و همچنین همبستگی مثبت معنی داری بین ESR و مقادیر (DAS28) درگروه بیماران مشاهده گردید.نتیجه گیری: چنین استنتاج می شود که احتمالا افزایش OPG می تواند پاسخ های التهابی به واسطه کاهش مقادیر سیتوکاینها در زنان مبتلا به آرتریت روماتوئید را کاهش داده و از تخریب استخوان محافظت کند و همچنین کاهش MGP نیز می تواند منجر به کلسیفیکاسیون عروقی در این بیماران شده و در نتیجه به دیواره عروق آسیب برساند.

هدف: جهان در حال پیر شدن است. افزایش طول عمر و در نتیجه تعداد سالمندان، باعث بروز نگرانی در خصوص مشکلات پیش رو و اجتناب ناپذیر خاص این دوران می گردد از هر 10 نفر بالای 65 سال انتظار می رود یک نفر مبتلا به بیماری الزایمر باشد و این نسبت در افراد بالای 85 سال به 4 نفر از 10 نفر افزایش می یابد. الزایمر بیماری پیشرونده است که در صورت عدم مداخله به مراحل پیشرفته تر میرسد. برخی روش ها نشان داده اند که میتوانند در پیشگیری و کند کردن سیر بیماری موثر باشند. هدف این مطالعه بررسی تاثیر فعالیت بدنی بر سطح کارکرد حافظه زنان 70-50 سال مبتلا به اختلال حافظه است.روش بررسی: این تحقیق نیمه تجربی است و با 16 آزمودنی زن آزمودنی زن (میانگین سن 61.1±6.5)، =MCI 0.5 (آسیب شناختی خفیف)، بی سواد و بدون فعالیت منظم بدنی و ذهنی اجرا گردید. توزیع افراد در گروه های تمرین (فعالیت بدنی) و کنترل (بی تمرینی) به روش تصادفی صورت گرفت (تعداد نفرات هر گروه=هشت نفر). طول دوره مداخله به مدت سه ماه، سه جلسه در هفته و هر جلسه به مدت 60 دقیقه برگزار شد. آزمون سطح کارکرد مغز (CDR) و روش تجزیه و تحلیل آنکوا، تعقیبی بونفرونی و آزمون تی زوجی استفاده گردید.یافته ها: نتایج نشان داد روش مداخله ای فعالیت بدنی در افزایش سطح حافظه زنان 70-50 سال با اختلال حافظه، تاثیر معناداری در سطح معناداری 0.05 داشته است و تاثیر پذیرترین خرده مقیاس، خرده مقیاس حافظه بوده است.نتیجه گیری: اجرای برنامه های بدنی بر حافظه بیماران با آسیب شناختی کم، تاثیر دارد.

سابقه و هدف: هیستامین به عنوان یک تنظیم کننده، در بسیاری از رفتارهای شبه اضطرابی حیوانات و انسان دخالت دارد. از طرفی داروهای میانجگری کننده رسپتور گابای A مانند بنزودیازپین برای درمان اضطراب استفاده شده اند. تجویز همزمان داروهای مزبور از نظر اضطراب می تواند مورد توجه باشد.مواد و روش ها: در مطالعه حاضر اثر تزریق داخل صفاقی هیستامین و دیازپام و تداخل این دو ماده بر رفتارهای شبه اضطرابی بررسی شد. پارامترهای اندازه گیری شده در صد زمان گذرانده %OAT= Open Arm Times)) در بازوی باز و درصد تعداد ورود به بازوی باز (%OAE= Open Arm Entries) در مدل مازبعلاوه ای شکل اضطراب بود.یافته ها: تجویز هیستامین 20 (میلی گرم بر کیلوگرم) به درون صفاق درصد زمان گذرانده در بازوی باز (%OAT) را کاهش داد، اما بر فعالیت حرکتی (LA= Locomotion Activity) تاثیری نداشت، که یک اثر اضطراب زایی را برای هیستامین نشان می دهد. تجویز دیازپام، بصورت زیر جلدی در دوز 1 میلی گرم بر کیلوگرم در صد زمان گذرانده در بازوی باز(%OAT)  و درصد تعداد ورود به بازوی باز(%OAE)  را بدون اثر بر فعالیت حرکتی افزایش داد که نشان دهنده کاهش اضطراب در گروههای مورد مطالعه است. تجویز دیازپام، بصورت زیر جلدی در دوز 1 ( میلی گرم بر کیلوگرم) قبل از تزریق داخل صفاقی هیستامین در دوز 20 میلی گرم بر کیلوگرم در صد زمان گذرانده در بازوی باز (%OAT) و درصد تعداد ورود به بازوی (%OAE) را بدون اثر بر فعالیت حرکتی (LA) افزایش داد که نشان دهنده کاهش اضطراب در گروههای مورد مطالعه است.نتیجه گیری: نتایج به دست آمده نشان می دهد که اثرات اضطراب زایی ایجاد شده به وسیله هیستامین، در حضور دیازپام معکوس می شود.

سابقه و هدف: بیماری سرطان یکی از مخرب ترین بیماری ها در جهان است و سرطان سینه یکی از شایع ترین انوع سرطان در بین زنان می باشد. هیدروکسی اوره از داروهای مهم در شیمی درمانی می باشد که با وجود خواص درمانی در دراز مدت عوارض جانبی متعددی را در پی دارد. این تحقیق با هدف استفاده از فناوری نانو دارورسانی به روش لیپوزومه کردن دارو درجهت کاهش عوارض جانبی و افزایش شاخص درمانی انجام گردید.مواد و روش ها: برای تهیه نانولیپوزوم، نسبت مشخصی از فسفاتیدیل کولین و کلسترول با یکدیگر ترکیب نموده و سپس داروی هیدروکسی اوره به آن اضافه کردیم. میانگین قطر هیدروکسی اوره نانولیپوزومه شده با کمک دستگاه زتا سایزر اندازه گیری شد. همچنین درصد انکپسولاسیون محاسبه شد. الگوی آزادسازی دارو از نانولیپوزوم ها نیز با استفاده از روش دیالیز انجام شد. در نهایت اثر سایتوتوکسیسیتی فرمولاسیون تهیه شده با استفاده از روش MTT مورد بررسی قرار گرفت.یافته ها: میانگین قطر هیدروکسی اوره ی نانولیپوزومه شده و با بازده انکپسوله شده هیدروکسی اوره نانولیپوزومه به ترتبب 402.5 نانومتر و 70.836 درصد محاسبه گردید . همچنین الگوی آزادسازی دارو از نانولیپوزوم ها به روش دیالیز نشان داد که میزان رهایش دارو از داروی نانولیپوزومه طی 28 ساعت برابر با %25.85 می باشد.نتیجه گیری: این مطالعه نشان داد که اثر سایتوتوکسیسیتی داروی نانولیپوزومه بیشتر از داروی استاندارد می باشد.

سابقه و هدف: دیابت قندی شایع ترین بیماری متابولیسم غیر طبیعی کربوهیدرات است که به علت نقص در ترشح انسولین یا نقص در عملکرد و یا هر دو ایجاد می شود. مشخص شده است که ملاتونین می تواند در متابولیسم قند نقش داشته باشد. بنابراین در این مطالعه اثر ترکیبات واجد حلقه ایندول (پیش ساز ملاتونین) روی رت های غیر دیابتی و دیابتی مورد بررسی قرار گرفت.مواد و روش ها: در این پژوهش رت های دیابتی و غیر دیابتی در 4 گروه طبقه بندی شدند. گروه کنترل رت هایی دیابتی و غیر دیابتی که روزانه آب و غذای معمولی در یافت کردند. گروه شم: رت های دیابتی و غیر دیابتی که روزانه 0.5 میلی لیترروغن هسته انگور (بعنوان حلال ترکیبات ایندولی) در یافت کردند. گروه تجربی 1  و 2: رت های دیابتی و غیر دیابتی که به ترتیب روزانه 4mg/kg ایندول، و 5 4 mg/kg -هیدروکسی ایندول 2-کربوکسیلیک اسید (5-HICA) در 0.5 میلی لیتر روغن هسته انگور دریافت کردند. برای دیابتی کردن از آلوکسان با یکبار تزریق دوز 150 mg/kg به صورت  IPاستفاده شد. در این پژوهش میزان قند خون، میانگین مصرف آب و ادرار، سطح انسولین سرم، اندازه گیری شد و بررسی های هیستولوژیکی از پانکراس نیز صورت گرفت.یافته ها: نتایج پس از تیمار 30 روزه نشان داد در گروه تجربی 1 دیابتی میزان قند خون، مصرف آب و ادرار به صورت معنی داری در P<0.001 کاهش یافت. در حالیکه سطح انسولین این گروه نیز افزایش یافت .(P<0.001) در گروه تجربی 2 دیابتی اثری کمتری بر میزان انسولین، قند خون و مصرف آب و ادرار داشت. همچنین بر رسی های بافت شناسی نشان دادند که ایندول در گروه تجربی 1 دیابتی سبب ترمیم بافت پانکراس شده است.نتیجه گیری: در این بررسی مشخص شد ایندول احتمالا اثرات سودمندی در کاهش قند خون و وافزایش سنتز انسولین و ترمیم پانکراس دارد.

سابقه و هدف: پراکسیدازها دارای عملکردهای زیادی در گیاهان از قبیل تغییرات دیواره سلولی با تنظیم هورمون، مکانیسم های دفاعی، تجزیه ایندول استیک اسید و سازش با استرس می باشد. در شرایط مختلف استرس، پراکسیداز گیاه را در برابر ناملایمات درونی و محیطی محافظت می کند.مواد و روش ها: پیازهای ریزومی (بنه ها) زعفران مزروعی (Crocus sativus) در ماه های تیر و آبان جمع آوری شدند. بنه ها به عنوان منبع عصاره آنزیمی مورد استفاده قرار گرفتند. این عصاره برای مطالعات بیشتر استفاده شد.یافته ها: نتایج نشان می دهد که در بنه های زعفران مزروعی در هر دو مرحله خواب و بیداری، افزایش غلظت سوبسترای گایاکول بیشتر از 70 میلی مولار باعث کاهش فعالیت پراکسیداز می شود.نتیجه گیری: از نتایج سینتیکی چنین می نوان استنباط کرد که حداقل دو ایزوفرم از پراکسیداز در بنه های زعفران وجود دارد و از این رو می تواند در فرایندهای مختلف رشد و نمو شرکت نماید.

سابقه و هدف: ذرات معلق موجود در هوا به عنوان یک شاخص مهم از کیفیت هوای خارجی مورد توجه هستند. بسیاری از مشکلات بهداشتی وابسته با غلظت های بالای این ذرات بوده است. تماس با آلودگی ناشی از بیو آئروسل ها تقریبا در زندگی شهری در سراسر جهان غیر قابل اجتناب است. تماس با میکروارگانیسم های هوای آزاد با دامنه وسیعی از اثرات مضر بر روی سلامتی مرتبط هست. این مطالعه با هدف اندازه گیری غلظت ذرات و غلظت باکتری ها و تاثیر پارامترهای محیطی بر غلظت باکتری ها در هوای شهر اهواز انجام گرفت.مواد و روش ها: نمونه برداری از هوا برای تشخیص حضور باکتری ها توسط نمونه بردار میکروبی هوا ( (Quick Take-30,SKC,USAصورت گرفت. محیط کشت مورد استفاده محیط کشت Tryptic Soy Agar (TSA) بود که محیط کشت مخصوص برای باکتری ها است. کلنی های رشد یافته بر روی محیط کشت مغذی (TSA ) به روش مستقیم و با استفاده از دستگاه کلنی کانتر شمارش شد و بر حسب واحد تشکیل کلنی بر متر مکعب (CFU/m3) بیان شد.یافته ها: میانگین غلظت ذرات PM25 ,PM10 و PM1 و در همه ایستگاه های نمونه برداری به ترتیب 149.35، 46.58 و mg/m3 25.6 غلظت کل باکتری ها CFU/m3 446.67 بیشترین غلظت باکتری ها در دی ماه و کم ترین میزان غلظت باکتری ها در بهمن ماه مشاهده گردید.نتیجه گیری: هر چه محیط دارای تراکم جمعیتی بیشتر و ترافیک شدیدتر و پوشش گیاهی کمتر باشد غلطت باکتری ها در آن محیط بیشتر است که این غلظت باکتری ها با دمای محیط و شاخص UV محیط رابطه معکوس دارد.

سابقه و هدف: بروسلا یک کوکوباسیل گرم منفی است که میزبانهای آن شامل انسان، گاو، بز، گوسفند و اسب می باشد. بروسلا از طریق شیر و فراورده های لبنی انتقال یافته و در انسان سبب ایجاد تب مالت می شود. روش های سرولوژیک تشخیص آن از حساسیت و دقت کافی برخوردار نبوده، علاوه بر آن، دارای نتایج مثبت و منفی کاذب فراوانی می باشند. هدف از این مطالعه بررسی میزان شیوع بروسلا در برخی از محصولات لبنی توسط تکنیک Nested PCR تعیین حساسیت و دقت این تکنیک می باشد.مواد و روشها: در این مطالعه 208 نمونه از محصولات لبنی شامل: 57 نمونه شیر خام گاو، 34 نمونه شیر پاستوریزه، 28 نمونه پنیر پاستوریزه، 23 نمونه پنیر سنتی، 33 نمونه شیر خام بز و 33 نمونه شیر خام گوسفند، از سطح استان تهران جمع آوری گردید  DNAنمونه ها به وسیله کیت (Cinna gene, Iran) DNP استخراج شد. سپس تست Nested PCR با کمک پرایمرهای اختصاصی بهینه گردید، حساسیت و اختصاصیت تکنیک مورد ارزیابی قرار گرفت.یافته ها: بررسی ها نشان داد از 57 نمونه شیر خام گاو، 19 نمونه، و از 34 نمونه شیر پاستوریزه، 10 نمونه، همچنین از 28 نمونه پنیر پاستوریزه فقط، 8 نمونه، و از 23 نمونه پنیر سنتی، 14 نمونه و از 33 نمونه شیر خام بز، 21 نمونه و در آخر از 33 نمونه شیر خام گوسفند، 19 نمونه PCR مثبت شدند.نتیجه گیری: نتایج نشان می دهد، تکنیک Nested PCR مورد بررسی در این مطالعه از حساسیت و دقت بالایی برخوردار است. از این رو، به نظر می رسد ضرورت استفاده از روش های مولکولی به عنوان یک روش تاییدی جهت تشخیص بروسلا در کنار روش های متداول غربالگری امری لازم می باشد.