مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

video

مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

sound

مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

نسخه انگلیسی

مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

بازدید:

1,218
مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

دانلود:

280
مرکز اطلاعات علمی Scientific Information Database (SID) - Trusted Source for Research and Academic Resources

استناد:

اطلاعات مقاله نشریه

عنوان

ساب کلونینگ و بیان ژن آلفافیتو پروتئین انسانی در مخمر پیکیا پاستوریس

صفحات

 صفحه شروع 91 | صفحه پایان 96

چکیده

 زمینه و اهداف: آلفافیتوپروتئین بطور طبیعی در سرم جنینی یافت می شود, در حالیکه تولید و ظاهر شدن آن بعد از تولد حاکی از وجود تومورهای سرطانی است. بنابراین با تعیین مقدار این پروتئین, در دوره های جنینی و بعد از تولد می توان عارضه های مختلف جنینی, توموری و غیر توموری را تشخیص داد. از اینرو تولید و خالص سازی این پروتئین به روش فن آوری DNA نوترکیب به منظور تولید کیت تشخیصی حایز اهمیت بسیار می باشد.روش بررسی: پیکیا پاستوریس مخمر متیلوتروفی است که برای تولید آلفافیتوپروتئین انسانی مورد استفاده قرار گرفت. برای تکثیر قطعه ژن مورد نظر از حامل کلونینگ pUC18 و برای بیان پروتئین از حامل دومیزبانه pHIL-S1 استفاده گردید. بعد از ایجاد پلاسمید نوترکیب pS1-AFP از روشهای الکتروپوریشن و روش شیمیایی لیتیوم کلراید برای انتقال به سلولهای مستعد سویه GS115-HIS- استفاده گردید. برای غربالگری نیز از محیط اگزوتروفیک فاقد هیستیدین استفاده گردید. به منظور بررسی نحوه اتصال ژن مورد نظر به ژنوم مخمری و فنوتیپ های حاصله, از روش PCR استفاده شد. در راستای بیان ژنی از محیط های کشت YPG و YPM استفاده گردید و میزان کمی و کیفی تولید پروتئین مورد نظر با استفاده از ژل SDS-PAGE و روش ELISA مورد بررسی قرار گرفت.یافته ها: برش آنزیمی پلاسمید نوترکیب pS1-AFP ترانسفورم شده حاکی از دریافت قطعه 1.78 Kbp ژن AFP بود که در ژل آگاروز (%1) بدست آمد. PCR به عمل آمده نیز وجود این قطعه را تایید کرد. انتخاب سویه های ترانسفورم شده mutS در مقایسه با mut+  و کشت آنها در محیط گلیسرول (YPG) تا حصول کدورت OD600=6 و سپس انتقال به محیط کشت متانول (YPM) با افزودن متانول تا %1 غلظت نهایی سبب حفظ القا تولید پروتئین در محیط اگزوتروفیک فاقد هیستیدین گردید. میزان تولید این پروتیین حدود 10 ug/ml بدست آمد.نتیجه گیری: این مطالعه نشان داد که قرار دادن ژن سیگنال ترشحی اسید فسفاتاز و راه انداز AOX1 در ابتدای ژن AFP برای بیان و ترشح این پروتئین مناسب می باشد. بنابراین می توان در راستای تولید آنتی بادی تک دودمانی (منوکلونال) از آن استفاده کرده و با خالص سازی آن کیت های تشخیصی آزمایشگاهی را طراحی کرد

استنادها

  • ثبت نشده است.
  • ارجاعات

  • ثبت نشده است.
  • استناددهی

    APA: کپی

    مشایخی، محمدرضا، ضرغامی، نصرت اله، شهباززاده، دلاور، روح وند، فرزین، عزیزی، محمد، و علنی، بهرنگ. (1384). ساب کلونینگ و بیان ژن آلفافیتو پروتئین انسانی در مخمر پیکیا پاستوریس . مجله پزشکی دانشگاه علوم پزشکی تبریز، 27(3)، 91-96. SID. https://sid.ir/paper/417053/fa

    Vancouver: کپی

    مشایخی محمدرضا، ضرغامی نصرت اله، شهباززاده دلاور، روح وند فرزین، عزیزی محمد، علنی بهرنگ. ساب کلونینگ و بیان ژن آلفافیتو پروتئین انسانی در مخمر پیکیا پاستوریس . مجله پزشکی دانشگاه علوم پزشکی تبریز[Internet]. 1384؛27(3):91-96. Available from: https://sid.ir/paper/417053/fa

    IEEE: کپی

    محمدرضا مشایخی، نصرت اله ضرغامی، دلاور شهباززاده، فرزین روح وند، محمد عزیزی، و بهرنگ علنی، “ساب کلونینگ و بیان ژن آلفافیتو پروتئین انسانی در مخمر پیکیا پاستوریس ،” مجله پزشکی دانشگاه علوم پزشکی تبریز، vol. 27، no. 3، pp. 91–96، 1384، [Online]. Available: https://sid.ir/paper/417053/fa

    مقالات مرتبط نشریه ای

    مقالات مرتبط همایشی

  • ثبت نشده است.
  • طرح های مرتبط

  • ثبت نشده است.
  • کارگاه های پیشنهادی






    بازگشت به بالا
    telegram sharing button
    whatsapp sharing button
    linkedin sharing button
    twitter sharing button
    email sharing button
    email sharing button
    email sharing button
    sharethis sharing button