هدف: تشخیص آنتی ژنهای ویروس IHNV در نمونه های بافتی برخی از کارگاه های تکثیر و پرورش قزل آلای رنگین کمان ایران.طرح: نمونه برداری به صورت تصادفی از موارد مشکوک به بیماری.حیوانات: بچه ماهیان قزل آلای رنگین کمان پرورشی.روش: تهیه گسترش از تعداد 99 نمونه بافت های خون ساز (کلیه و طحال) و کبد بچه ماهیان زیر 3 گرم از کارگاه های تکثیر و پرورش واقع در استانهای تهران و چهارمحال و بختیاری و ثابت نمودن گسترش ها توسط استون سرد و سپس انجام آزمایش آنتی بادی درخشان به روش غیر مستقیم و مطالعه گسترش ها در زیر میکروسکوپ فلورسانت با بزرگنمایی200×، 400×،1000×.نتایج: از مجموع 99 نمونه مورد مطالعه، تعداد 11 نمونه مثبت تشخیص داده شد که متعلق به کارگاه های استان چهارمحال و بختیاری بودند.نتیجه گیری: با عنایت به تشخیص آنتی ژنهای ویروسIHNV در برخی نمونه های مورد مطالعه و با توجه به خسارات اقتصادی قابل توجه این بیماری انجام بررسیهای غربالگری و نیز انجام مطالعات دقیقتر مانند جداسازی و مطالعه پاتوژنیسیته ویروس جدا شده امری بدیهی می باشد.

به منظور بررسی ساختار و غربالگری جمعیت مولدین ماهی قزل آلای رنگین کمان کارگاه شهید باهنر کلاردشت بر اساس حضور یا عدم حضور نشانگرهای ریزماهواره پیوسته با صفت مقاومت به ویروس IHN در این مولدین، تعداد 92 نمونه از بافت باله دمی مولدین در فصل تکثیر تهیه و پس از استخراج DNA از نمونه ها، به تکثیر این جایگاه های ریزماهواره پرداخته شد. واکنش زنجیره ای پلیمر از (PCR) برای تکثیر ریزماهواره های پیوسته با صفت مقاومت به ویروس IHN در مولدین، به منظور بررسی حضور یا عدم حضور این نشانگرها بر اساس دو پرایمر Ssa94NVH و Ssa7NVH انجام گرفت. نتایج حاصل از این پژوهش حضور نشانگرهای Ssa94NVH و Ssa7NVH را در این جمعیت به ترتیب 95.46 و 98.49 درصد گزارش نمودند. تعداد چند شکلی های تولید شده برای این دو نشانگر نیز به ترتیب شامل 11 و 4 چند شکلی بود. در بررسی حضور دو نشانگر مذکور به تفکیک جنسیت در دو جنس نر و ماده بر اساس نشانگر Ssa94NVH به ترتیب 92.4 و 97.5 درصد و بر اساس نشانگر Ssa7NVH به ترتیب 100 و 97.5 درصد حضور این نشانگرها نشان داده شد.

هدف از اجرای این پژوهش، شناسایی عوامل مختلف بیماری زا ویروسی ماهی قزل آلای رنگین کمان با استفاده از روش Real-Time PCR به منظور تشخیص سریع و دقیق بیماری های ویروسی شایع شامل بیماری نکروز عفونی بافت خونساز (IHN)، بیماری سپتی سمی هموراژیک ویروسی (VHS) و بیماری نکروز عفونی پانکراتیک (IPN) در جمعیت مولدین نسل پایه نگهداری شده در طرح کلان ملی تولید ماهیان عاری از بیماری های خاص (SPF) بوده است. بدین منظور از مولدین مزارع منتخب مورد تایید سازمان دامپزشکی کشور در استان های مازندران، کهگیلویه و بویراحمد و آذربایجان غربی نمونه برداری شد. نمونه برداری از ماهیان در رده های سنی متفاوت و از اندام های مختلف صورت پذیرفت و نمونه ها بلافاصله در ازت مایع منجمد شدند. استخراج RNA و آزمایشات Real-Time PCR با استفاده از پرایمرهای مربوط به ویروس های مورد نظر انجام شد. نتایج حاصل از آزمایش ماهیان سالم و مشکوک به بیماری های ویروسی به روش Real-Time PCR، وجود ویروس های بیماری زای VHS و IHN را در تعدادی از مزارع منتخب نشان داد در حالیکه ویروس بیماری زای IPN در نمونه ها شناسایی نشد. بر اساس نتایج حاصل از این بررسی بنظر می رسد که روش Real-Time PCR می تواند به عنوان روش تشخیصی سریع در آزمایش های غربال گری بیماری های ویروسی قزل آلای رنگین کمان و نیز روش مکمل تشخیص ویروس های بیماری زا در ادامه آزمایش های متداول کشت بافت مورد استفاده قرار گیرد.

متن کامل این مقاله به زبان انگلیسی می باشد. لطفا برای مشاهده متن کامل مقاله به بخش انگلیسی مراجعه فرمایید.لطفا برای مشاهده متن کامل این مقاله اینجا را کلیک کنید.

به منظور بررسی بیماریهای نکروز عفونی بافتهای خونساز و لوزالمعده ای ماهی قزل آلا که از بیماری های پراهمیت و عامل ضررهای اقتصادی در پرورش آزاد ماهی ها از جمله قزل آلای رنگین کمان می باشند. در طی مطالعه یک و نیم ساله، 153 نمونه بافتی از ماهیهای مولد قزل آلای رنگین کمان و 607 نمونه ماهی (300-400 روزه) از 5 مزرعه قزل آلای رنگین کمان در استان کهکیلویه بویراحمد و استان فارس جمع آوری گردید. با استفاده از آنتی سرم های اختصاصی پلی کلونال و مونوکلونال و آزمایش الیزای ساندویچی مشخص گردید که آنتی ژنهای ویروس نکروز عفونی بافتهای خونساز (سویه فرانسوی) و ویروس نکروز عفونی لوزالمعده ای (سویه SP) که سویه حادی می باشد در بافتهای مولدین و بافتهای بچه ماهیها در مناطق کهکیلویه بویراحمد با درجه حرارت آب 14-10 درجه سانتی گراد تا سن 300 روزگی وجود دارند در حالیکه این آنتی ژنها در بچه ماهی های مناطق فارس با درجه حرارت آب بالاتر از 14 درجه سانتی گراد بعد از سن 80 روزگی مشاهده نگردیدند. هیچ آنتی ژن ویروسی مربوط به ویروس عامل بیماری سپتی سمی هموراژیک (سویه reva) در نمونه های فوق تشخیص داده نشد.

زمینه مطالعه: بیماری های نکروز عفونی مراکز خون ساز (IHN)، سپتی سمی خونریزی دهنده ویروسی (VHS) و نکروز عفونی لوزالمعده (IPN) از جمله بیماری های ویروسی مهم آزاد ماهیان پرورشی به شمار می روند که منجر به بروز تلفات گسترده در بین آن ها می شوند.هدف: تحقیق حاضر با هدف بررسی وضعیت آلودگی ویروس های فوق در تخم های چشم زده ایرانی و خارجی و میزان پراکنش این ویروس ها در بین مزارع تکثیر استان چهارمحال و بختیاری انجام شد.روش کار: از این رو سه شهرستان فارسان، کوهرنگ و لردگان انتخاب و در هر شهرستان نمونه گیری از سه مرکز تکثیر صورت پذیرفت. از هر مزرعه نیز به طور تصادفی 20 عدد تخم (سبز یا چشم زده) برداشت نموده و با قرار دادن در لوله های درب دار استریل، پس از ثبت برخی فاکتورهای فیزیکوشیمیایی آب، جهت ردیابی مولکولی ویروس های فوق با تست Reverse Transcriptase-PCR به مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی ارسال شد.نتایج: طی این تحقیق %23.3 تخم های مورد مطالعه آلوده و %76.7 آن ها غیرآلوده بود. میزان آلودگی نیز در ویروس های IPN، IHN و VHS به ترتیب 12.5، 10 و %0.83 بود. شهرستان فارسان با %19.15 بیشترین و شهرستان های لردگان و کوهرنگ با 3.33 و %0.83 کمترین میزان آلودگی را در بین مناطق مورد بررسی به خود اختصاص داده اند. همچنین در مقایسه میزان آلودگی تخم ها بر اساس منبع ایرانی یا خارجی بودن آن ها، میزان آلودگی در تخم های ایرانی %20 و در تخم های خارجی %3.33 بود.نتیجه گیری نهایی: نتیجه کلی تحقیق حاضر نشان از آلودگی نسبی تخم های چشم زده قزل آلای رنگین کمان به ویروس های بیماریزای فوق و توجه به اهمیت همه گیرشناختی آن در بین مزارع پرورشی آن استان و سایر استان های کشور دارد.

شناسایی مراکز تکثیر آلوده به ویروس بیماری نکروز عفونی بافت های خونساز (IHN) در پنج استان عمده تولید کننده تخم چشم زده و بچه ماهی قزل الای رنگین کمان کشور شامل مازندران، چهارمحال و بختیاری، کهکیلویه و بویراحمد، لرستان و فارس با استفاده از تکنیک های IFAT و  nested-RT-PCR و مقایسه این دو تکنیک با یکدیگر مورد مطالعه قرار گرفته است. بافت های کلیه، کبد و طحال بچه ماهی های قزل آلای رنگین کمان طی شرایط استریل در محل مزارع جداسازی و نهایتا در فریزر - درجه سانتیگراد نگهداری شد. به منظور افزایش اختصاصیت واکنش RT-PCR، یک واکنش ثانویه nested-PCR روی محصول اولیه انجام گرفت. پس از هشت ماه آزمایش های فوق الذکر مجددا روی نمونه های مثبت این مزارع تکرار شد تا حساسیت این دو روش در طی زمان برای نمونه های قدیمی مشخص گردد. نتایج حاصله نشان داد که تمامی پنج استان یاد شده آلوده به ویروس IHN هستند  (چهارده مزرعه از بیست و هفت مزرعه نمونه برداری شده). نتایج بدست آمده نشان داد که هر چند IFAT حساسیت قابل قبولی برای شناسایی IHNV در مراحل اول آلودگی از خود نشان می دهد با این وجود آزمایش nested-RT-PCR واجد توانایی بالاتر از RT-PCR و حساسیت بالاتری نسبت به IFAT بخصوص برای نمونه های نگهداری شده در فریزر به مدت چندین ماه می باشد.

به منظور تعیین شیوع و پراکنش جغرافیایی بیماری های ویروسی سپتی سمی خونریزی دهنده ویروسی (VHS) و نکروز عفونی بافت های خون ساز (IHN) در ماهیان قزل آلا رنگین کمان (Oncorhynchus mykiss) کشور و برنامه ملی مراقبت سالانه در کشور اجرا گردید. در این برنامه که در دو فاز زمستانه و بهاره صورت گرفت، از تمامی مراکز تکثیر، تفریخ و پرورش ماهیان قزل آلای کشور، نمونه برداری صورت گرفته و نمونه اخذشده مورد آزمون مولکولی Real-Time PCR قرار گرفت. نتایج به دست آمده ابتدا در نرم افزار Excel واردشده و با استفاده از نرم افزار SPSS مورد تجزیه وتحلیل آماری قرار گرفت. بر اساس نتایج به دست آمده، شیوع ردیابی بیماری VHS، در نیمه دوم سال 96، در مزارع تکثیر و تفریخ استان های خراسان رضوی (54/4%)، کهگیلویه و بویر احمد (5/3%) و چهارمحال بختیاری (04/2%) و در سه ماهه اول سال 97، استان های اردبیل (66/16%)، زنجان (38/15%) و مازندران (56/2%) شیوع داشته است. در کل کشور شیوع ردیابی بیماری در نیمه دوم سال 96، 86/0% و در سه ماهه اول سال 97، 15/1% بوده است. در مورد بیماری IHN، شیوع ردیابی بیماری در نیمه دوم سال 96 در بین مراکز تکثیر و تفریخ، در استان های چهارمحال بختیاری (081/4%) و مازندران (56/2%) بوده و در سه ماهه اول سال 97 در استان های قزوین (4/7%) و مازندران (56/2%) مشاهده گردید. در کل کشور شیوع ردیابی بیماری در نیمه دوم سال 96، 86/0% و در سه ماهه اول سال 97، 95/. % بوده است. با توجه به پراکندگی بیماری ها و همچنین اهمیت اقتصادی این بیماری ها توجه به روش های پیش گیری و ارتقاء شرایط امنیت زیستی مراکز به منظور تامین بچه ماهی سالم برای کاهش خسارت مهم و ضروری است.