مقدمه: شیوع بالای نقایص استخوانی در بیماران دچار ضربه در تصادفات و بروز کمبود بافت استخوانی در اعمال جراحی کرانیوتومی، ضرورت تام و تمام در تحقیق حاضر سلول های استئوبلاست به دست آمده از استخوان کالواریا در محیط سه بعدی آلژینات کشت داده شد و میزان تکثیر و زنده ماندن آن ها با سلول های حاصل از کشت تک لایه ای مقایسه گردید.روش ها: در جریان اعمال جراحی کرانیوتومی 6 نمونه استخوانی در اندازه های 1×1 سانتی متر از استخوان کالواریا تحت شرایط استریل بر داشته و پس از جداسازی بافت های همبند و شستشوی مکرر با سرم فیزیولوژی، قطعات استخوانی به ابعاد کوچک در حدود 1×1 میلی متر خرد شد و در دیش های محتوی محیط کشت قرار داده شد و به انکوباتور محتوی 5 درصد دی اکسید کربن با رطوبت نسبی و دمای 37 درجه سانتی گراد منتقل گردید. پس از گذشت 9 تا 10 روز، سلول ها شروع به خروج از استخوان نمودند و 2 هفته پس از شروع کشت، سلول ها کف پلیت را به طور کامل پوشاندند. پس از تریپسینه کردن و شمارش، سلول ها به طور مساوی به دو بخش تقسیم گردید و کشت تک لایه ای و در محیط دارای ژل آلژینات انجام شد. جهت اثبات وجود سلول های استئوبلاست و فعالیت آن ها از رنگ آمیزی های Von kossa, Alkaline phosphatase و Azan استفاده شد. برای بررسی درصد زنده ماندن سلول ها از رنگ آمیزی Trypan blue استفاده گردید.یافته ها: در کشت تک لایه ای، سلول ها با ظاهری شبه فیبروبلاستی و دوکی مشخص گردید در حالی که در کشت آلژینات، سلول ها نمای مدور داشت. در هر دو نوع کشت، تکثیر سلولی و فعالیت استخوان سازی وجود داشت. رنگ آمیزی Alkaline phosphatase در دو گروه وجود سلول های استئوبلاست را به اثبات رسانید و رنگ آمیزی های Von kossaو Azanوجود ماتریکس معدنی و آلی را در دو گروه تایید کرد. با مقایسه تعداد سلول ها در روز 21 با تعداد سلول ها در روز 1 همان گروه، اختلاف معنی داری مشخص شد (P<0.001). همچنین شمارش سلولی دو گروه در روز 21 نشان داد که میزان تکثیر در گروه آلژینات نسبت به گروه تک لایه ای بیشتر بوده، اختلاف معنی داری مشاهده شد (P<0.001).نتیجه گیری: این مطالعه نشان داد که سلول های استئوبلاستی بدون استفاده از آنزیم در محیط کشت قادر به خروج از بافت استخوانی است و محیط سه بعدی ژل آلژینات سدیم در مقایسه با کشت تک لایه، قادر است تکثیر و بقای این سلول ها را به طور بارز افزایش دهد.